在核酸分子的恒溫?cái)U(kuò)增過(guò)程中,無(wú)論采用LAMP、HDA、RCA、CPA、SMAP等擴(kuò)增技術(shù),這種高速度的擴(kuò)增特性,均不可避免的引起假陽(yáng)性擴(kuò)增。這種假陽(yáng)性的擴(kuò)增情況在LAMP擴(kuò)增中表現(xiàn)尤為明顯,由于LAMP擴(kuò)增用到很高濃度的引物,因此難免保證有少量錯(cuò)配和引物Dimer,這些輕微的污染都會(huì)導(dǎo)致在LAMP高速擴(kuò)增中造成假陽(yáng)性。HaiGene優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液,配合獨(dú)有的顯色技術(shù)和陰性控制技術(shù)建立的預(yù)混恒溫mix系列產(chǎn)品,可高靈敏度、高特異性的用于LAMP HNB變色、LAMP紅黃變色、LAMP OG變色、 LAMP 濁度分析、LAMP SYBR Green熒光檢測(cè)、HDA熒光檢測(cè)、RCA熒光檢測(cè)、CPA熒光檢測(cè)、SMAP熒光檢測(cè)的擴(kuò)增反應(yīng)。在LAMP擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)中,與其它公司提供的 DNA/RNA LAMP MasterMix 或 LAMP Mix相比,得益于 Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶的出色性能, Bst 4.0 IsoAmp Red MasterMix具有更快的擴(kuò)增速度和雜質(zhì)耐受性。 Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶對(duì)dUTP底物的超強(qiáng)識(shí)別能力,擴(kuò)增反應(yīng)所需的核苷酸底物dTTP可被dUTP完全取代,因此擴(kuò)增產(chǎn)物均包含dUTP,在配合熱敏UDG的情況下,氣溶膠污染物,將會(huì)在起始反應(yīng)階段被徹底清除。而后續(xù)熱敏UDG在65℃條件下3min內(nèi),完全不可逆失活;從而既能消除污染物,又能保證核酸正常擴(kuò)增。因此,應(yīng)用該試劑能大大降低LAMP反應(yīng)中由于氣溶膠污染造成的假陽(yáng)性信號(hào)。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
使用特征 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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以2019-nCov核酸擴(kuò)增為例三種方法的性能比較 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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實(shí)例展示 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
1、A3824-01 紅黃變色反應(yīng)(肉眼觀察) 以2019-nCoV 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起始前,下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2、A3824-02 搭配 OG 橙綠變色反應(yīng)管(A3821)(肉眼觀察) 以2019-nCoV 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起始前,下圖為 65 度反應(yīng) 20min 后。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3、A3824-03 用于熒光檢測(cè)(便攜式恒溫檢測(cè)儀) 以2019-nCoV 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起始前,下圖為 65 度反應(yīng) 26min 后。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4、A3802 用于HNB變色擴(kuò)增反應(yīng) 采用環(huán)引物對(duì)7個(gè)樣本(HHV-6 DNA核酸模板進(jìn)行恒溫HNB變色檢測(cè)反應(yīng)),NTC為不加模板的對(duì)照,產(chǎn)物以HNB顯色如下圖。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
5、首先使用含dUTP的Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix擴(kuò)增獲得三種基因產(chǎn)物(AFSV P72,Covid-19 N Gene-1,Covid-19 N Gene-2),然后以105拷貝的含U產(chǎn)物作為模板,分別用Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix(with UDG)和Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix 進(jìn)行擴(kuò)增,反應(yīng)結(jié)束后統(tǒng)計(jì)兩組之間的Ct,結(jié)果為:UDG組在30min內(nèi)幾乎不起峰,無(wú)信號(hào);未加UDG組均在4min之前起峰,表明該Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix(with UDG)具有良好的去除殘留模板的能力。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
關(guān)于LAMP核酸擴(kuò)增的技術(shù)專利與商標(biāo):LAMP核酸擴(kuò)增技術(shù)專利由日本榮研化學(xué)株式會(huì)社所擁有(專利號(hào)CN1420928A/CN1222614C)。除此外,LAMP商標(biāo)也隸屬日本榮研化學(xué)株式會(huì)社。恒溫?cái)U(kuò)增原料用酶與預(yù)混Mix系列產(chǎn)品,可用于LAMP擴(kuò)增反應(yīng),但并不僅限于LAMP擴(kuò)增,還可以進(jìn)行RCA (Rolling Circle Amplification)、HDA(Helicase Dependent Amplification)、 SMAP(Smart Amplification Process)、CPA(Crossing Priming Amplification)等恒溫?cái)U(kuò)增方法。 |
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