神經(jīng)元是通過電和化學(xué)信號(hào)處理和傳輸信息的可電刺激細(xì)胞。 化學(xué)信號(hào)通過突觸與其他細(xì)胞的專門連
接發(fā)生。 神經(jīng)元相互連接形成網(wǎng)絡(luò)。 神經(jīng)元是神經(jīng)系統(tǒng)的核心組成部分， 包括大腦、 脊髓和周圍神經(jīng)節(jié)。
小鼠神經(jīng)干細(xì)胞 （NSC） 成神經(jīng)元細(xì)胞誘導(dǎo)分化試劑盒， 包含神經(jīng)干細(xì)胞成神經(jīng)元誘導(dǎo)分化基 礎(chǔ)培養(yǎng)基和其他添加物組成。 該產(chǎn)品已經(jīng)成功應(yīng)用于小鼠神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元的分化。
注意： 本產(chǎn)品僅提供給進(jìn)一步科研使用， 不可用于臨床治療等其他用途。
| 試劑盒成分 | 貨號(hào) | 體積 |
| Basal Medium For Cell Culture 細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 03011 | 98 mL |
| Supplements For Mouse NSC Neurogenic Differentiation 小鼠神經(jīng)干細(xì)胞成神經(jīng)元誘導(dǎo)分化添加物 | 04081 | 2 mL |
質(zhì)量控制
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通過細(xì)菌、 真菌、 支原體、 內(nèi)毒素檢測。 通過滲透壓、 pH 檢測。 通過產(chǎn)品性能檢測。 |
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詳情見 《產(chǎn)品檢測報(bào)告》 。 |
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處理原則 |
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嚴(yán)格的無菌環(huán)境。 務(wù)必保證實(shí)驗(yàn)室整體和操作區(qū)域的清潔。 規(guī)范的操作方式。 請(qǐng)按照產(chǎn)品說明書描述的方式操作， 嚴(yán)格控制變量， 做好對(duì)照實(shí)驗(yàn)。 各成分需按照保存條件妥善存放， 并盡快使用。 若短期內(nèi)無法用完整套培養(yǎng)基， 應(yīng)按套裝內(nèi)各成分體積比例分批配制并分裝保存。 |
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產(chǎn)品穩(wěn)定性及保存條件 |
1. 套裝內(nèi)所有成分均需避光保存。
2. 套裝內(nèi)基礎(chǔ)培養(yǎng)基需置于 4℃冰箱保存， 保質(zhì)期為 1 年； 其他成分需置于-20℃保存， 保質(zhì)期為 2 年。
3. 配制后的完全培養(yǎng)基， 需放置 4℃保存， 保質(zhì)期為 1 個(gè)月； 若能保證培養(yǎng)條件穩(wěn)定， 容器密封性能良
好， 避免冷熱交替， 則保質(zhì)期可適當(dāng)延長， 但不得超過 45 天。
4. 所有產(chǎn)品請(qǐng)于保質(zhì)期內(nèi)使用； 過期的成分可能嚴(yán)重影響培養(yǎng)效果。
所需材料
小鼠神經(jīng)干細(xì)胞成神經(jīng)元細(xì)胞誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基試劑盒
清潔、 無菌、 質(zhì)量穩(wěn)定的一次性耗材 （移液管、 移液器吸頭、 離心管等）
潔凈的封口膜、 鋁箔紙等避光材料
操作步驟
1. 配制前至少 30 min， 將套裝中 小鼠神經(jīng)干細(xì)胞成神經(jīng)元誘導(dǎo)分化添加物放置于室溫， 直至完
全融化。
2. 上下顛倒或輕彈試劑管以混勻試劑。
3. 用 75%醫(yī)用酒精仔細(xì)擦拭所有成分外包裝。 在超凈臺(tái)內(nèi)打開包裝。
4. 將 小鼠神經(jīng)干細(xì)胞成神經(jīng)元誘導(dǎo)分化添加物全部加入 細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。
5. 擰緊基礎(chǔ)培養(yǎng)基瓶蓋， 輕柔并充分搖勻。
注意： 若短期內(nèi)無法用完全部培養(yǎng)基， 我們建議分批配制； 請(qǐng)按照套裝內(nèi)各成分比例， 配制所需量； 但剩余的成分必須嚴(yán)格按照各自的保存條件妥善保存， 并且不可多次凍融。
6. 用封口膜密封瓶口， 用鋁箔紙包裹瓶身， 并標(biāo)注名稱、 配制日期等信息。
注意： 小鼠神經(jīng)干細(xì)胞成神經(jīng)元細(xì)胞誘導(dǎo)分化試劑盒內(nèi)的所有成分都嚴(yán)格控制無菌， 一般情況 下我們不建議再次除菌。 若配制過程有污染風(fēng)險(xiǎn)， 可將完全培養(yǎng)基過濾除菌。
誘導(dǎo)分化操作規(guī)程
所需材料
小鼠神經(jīng)干細(xì)胞成神經(jīng)元細(xì)胞誘導(dǎo)分化試劑盒
Phosphate-BufferedSaline (1×PBS)
Poly-L-lysine （PLL）
Laminin
無菌超純水
操作步驟
培養(yǎng)器皿表面 Poly- L-lysine （PLL） /Laminin 鋪板
1. 細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)前至少一天， 進(jìn)行 PLL/Laminin 鋪板準(zhǔn)備。
2. 使用無菌超純水稀釋 PLL 至終濃度為 15 μg/mL 備用。
3. 向培養(yǎng)板中加入適量步驟 2 中的 PLL 溶液， 搖勻至均勻覆蓋底面。
4. 室溫放置 30 min。
5. 吸去 PLL 溶液， 使用適量的無菌水清洗一次。
6. 用無菌超純水稀釋 Laminin 至終濃度為 15 μg/mL 備用。
7. 向培養(yǎng)板中加入步驟 6 中的 Laminin 溶液， 搖勻至均勻覆蓋底面， 封口膜封口后放置 4℃過夜備用。
注意： 包被后的培養(yǎng)板， 在無菌和 Laminin 不蒸干的條件下， 可以在 4℃存放一周， 請(qǐng)于一周內(nèi)使
用。
8. 使用前將 Laminin 吸去， 并用 PBS 清洗一次， 晾干后備用。
小鼠神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)操作規(guī)程
1. 將完全培養(yǎng)基預(yù)熱至 37℃。
2. 準(zhǔn)備 15 mL 或其他型號(hào)離心管， 收集培養(yǎng)容器中的培養(yǎng)基。
3. 用小鼠神經(jīng)干基礎(chǔ)培養(yǎng)基 （若有） 洗滌細(xì)胞 1 次， 注意動(dòng)作輕柔， 清洗全面， 收集基礎(chǔ)培養(yǎng)基。
4. 收集的所有細(xì)胞懸液以 160×g 離心 5 min。
5. 離心后去除上清。 加入 1 mL 完全培養(yǎng)基， 輕柔吹打細(xì)胞沉淀約 15~20 次， 充分吹散、 混勻。
注意： 吹打動(dòng)作不可劇烈， 避免產(chǎn)生大量氣泡， 否則可能損傷和損失細(xì)胞。
6. 將細(xì)胞按(2.5~4) ×104 個(gè)活細(xì)胞/cm2 接種至適宜的培養(yǎng)容器內(nèi)。
7. 搖勻細(xì)胞， 放入 37℃、 5%CO2、 飽和濕度的 CO2 培養(yǎng)箱中。
8. 傳代次日， 觀察細(xì)胞狀態(tài), 可適量添加新鮮培養(yǎng)基。
注意： 若傳代后發(fā)現(xiàn)較多細(xì)胞死亡， 則應(yīng)進(jìn)行換液操作 （詳見傳代步驟 2~4， 離心后去除上清， 用 1 mL 完全培養(yǎng)基輕輕吹散沉淀幾次后接種即可， 請(qǐng)勿重復(fù)吹打）
神經(jīng)元細(xì)胞誘導(dǎo)分化操作規(guī)程
1. 將神經(jīng)干細(xì)胞按 2 x104 個(gè)細(xì)胞/cm2 鋪至經(jīng)過 PLL/Laminin 包被的六孔板中。
2. 搖勻細(xì)胞， 放入 37℃、 5%CO2、 飽和濕度的 CO2 培養(yǎng)箱中。
3. 2 天后， 更換 小鼠神經(jīng)干細(xì)胞成神經(jīng)元細(xì)胞誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基。
4. 之后， 每 3 天更換一次新鮮誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基。
5. 在第 7 天進(jìn)行相關(guān)分析或提取 RNA 或蛋白進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
