国产商清国产精品国产k_囯产亚州中文字幕日韩在线_国产福在线永久视频_欧美日有码视频√_天天躁夜夜躁狠狠久久kk_日韩中文字幕精品在线观看_毛片a级三毛片免费播放_亚州精品中文字幕乱码三区_国产在线电影一区_国产AV青青大帝

您好,歡迎光臨上海雅吉生物商城!
工作時(shí)間:9:00-18:00
全國(guó)服務(wù)熱線:021-34661276

NADPH細(xì)胞色素C還原酶(NCR)測(cè)試盒

訂購(gòu)數(shù)量:
規(guī)格
價(jià)格庫(kù)存
訂購(gòu)熱線:021-34661276
我要詢價(jià)
  • 商品詳情
  • 售后服務(wù)
  • 相關(guān)文獻(xiàn)

    意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:

細(xì)胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶,在外源物質(zhì)代謝中具有重要作用,尤其是藥物和毒物的代謝。NCR作為P450酶系的重要一員,催化氧化型P450還原再生。

測(cè)定原理:

NCR催化NADPH還原氧化型細(xì)胞色素c生成還原型細(xì)胞色素c,還原型細(xì)胞色素c550nm處有特征吸收峰;通過(guò)測(cè)定550nm吸光度的增加速率,來(lái)計(jì)算NCR活性。

自備儀器和用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)、普通離心機(jī),超速離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配

試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加100mL蒸餾水充分溶解。

試劑二:液體×1瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存。臨用前配制,加2.6 mL蒸餾水充分溶解,4℃保存。

試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前配制,加550 μL蒸餾水充分溶解,4℃保存。

粗酶液提。

1、除去細(xì)胞核和線粒體等:稱約0.5g組織,加入4℃預(yù)冷的1 mL試劑一,冰上充分研磨,10 000g 4℃離心30min,取上清液,轉(zhuǎn)移到超速離心管中。

2、粗制微粒體:4℃,100 000g,離心60min,棄上清液。

3、除血紅蛋白等雜質(zhì):向步驟2的沉淀中加1 mL試劑一,蓋緊后充分震蕩溶解,100 000g離心30min,棄上清液。

4、最終微粒體:向步驟3的沉淀中加試劑二0.5 mL,蓋緊后充分震蕩溶解,4℃保存待測(cè)。

測(cè)定操作:

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到550 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二在37℃水浴中預(yù)熱30min。

3. 空白管:取1mL玻璃比色皿,依次加入50μL蒸餾水、900μL試劑二、50μL試劑三和10μL試劑四,迅速混勻后于550nm處測(cè)定2min內(nèi)吸光值變化,第10 s和第130 s吸光值分別記為A1A2,A空白管=A2-A1。

4. 測(cè)定管:取1mL玻璃比色皿,依次加入50μL粗酶液、900μL試劑二、50μL試劑三和10μL試劑四,迅速混勻后于550nm處測(cè)定2min內(nèi)吸光值變化,第10 s和第130 s吸光值分別記為A3A4,A測(cè)定=A4-A3。

注意:空白管只需要做一次。

計(jì)算公式

(1).按照蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:37℃中,每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol還原型細(xì)胞色素C1個(gè)酶活單位。

NCR酶活性 (nmol/min/mg prot)= (A測(cè)定管-A空白管)÷ε÷d×V反總÷Cpr×V樣)÷T

= 529×(A測(cè)定管-A空白管)÷Cpr

(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義:37℃中,每克樣品每分鐘催化產(chǎn)生1nmol還原型細(xì)胞色素C1個(gè)酶活單位。

NCR酶活性(nmol/min/g 鮮重)= (A測(cè)定管-A空白管)÷ε÷d×V反總÷W×V÷V樣總÷ T

= 265×(A測(cè)定管-A空白管W

ε:還原型細(xì)胞色素C摩爾消光系數(shù),19100L/mol/cm=0.0191L/μmol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,1010μL=0.00101L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,需要另外測(cè)定;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,50μL=0.05mLV樣總:加入提取液體積,0.5mL;W:樣本質(zhì)量,gT:反應(yīng)時(shí)間,2min

 

注意事項(xiàng):

試劑三、試劑四臨用前配制,配好未使用完的4可保存兩天。

我要詢價(jià)
*聯(lián)系方式:
(可以是QQ、MSN、電子郵箱、電話等,您的聯(lián)系方式不會(huì)被公開(kāi))
*內(nèi)容:


微信客服
掃一掃立即咨詢


微信客服
掃一掃立即咨詢

銷(xiāo)售電話:

021-34661275

021-34661276

15301693058