描述：
皮膚組織由表皮、真皮和皮下脂肪組成。由于皮膚組織獨(dú)特的結(jié)構(gòu)，所以研磨勻漿非常困難，在提取總
蛋白時(shí)也十分難裂解。使用傳統(tǒng)的溶液蛋白質(zhì)提取方法如 RIPA，提取皮膚總蛋白效率，產(chǎn)率都極低。提取的
蛋白質(zhì)圖譜也是不完整的。本試劑盒使用離心管柱技術(shù)及優(yōu)化的裂解液，采取物理研磨和化學(xué)裂解相結(jié)合的
方法，為人和動(dòng)物皮膚組織總蛋白的提取提供了一種高效的方法。本試劑盒可簡單快速的提取高質(zhì)量皮膚總
蛋白，無蛋白丟失，可以根據(jù)特定的下游應(yīng)用選擇變性細(xì)胞裂解液或天然細(xì)胞裂解液。整個(gè)提取過程不到 10
分鐘即可完成，蛋白質(zhì)得率在 1-5mg/ml。試劑盒所提供試劑及耗材可以滿足客戶 50 個(gè)樣品實(shí)驗(yàn)。
應(yīng)用：
用該試劑盒提取的蛋白質(zhì)可用于許多下游應(yīng)用，如 SDS-PAGE, WB，IP，ELISA，酶活性測定和蛋白質(zhì)組學(xué)分
析。緩沖劑與 IMAC 樹脂兼容，可用于 His 標(biāo)簽蛋白純化。在質(zhì)譜分析之前需將提取的蛋白質(zhì)樣品中的鹽和
表面活性劑除去。
試劑盒組分
1. 25ml 變性細(xì)胞裂解液
2. 25ml 天然細(xì)胞裂解液
3. 5g 蛋白研磨粉
4. 2 根塑料研磨棒
5. 50 個(gè)離心管柱
6. 50 個(gè)收集管
儲(chǔ)存：常溫
所需附加材料
臺式離心機(jī)最高轉(zhuǎn)速可以達(dá)到 14000-16000xg
液可以預(yù)冷，不會(huì)析出。裂解緩沖液中不含蛋白酶抑制劑，如果蛋白易水解，建議在使用前將蛋白酶抑制
劑 cocktail 添加到緩沖液中。為了測定蛋白質(zhì)濃度，推薦使用 BCA 法測定蛋白濃度。研究蛋白磷酸化，
磷酸酶抑制劑（羅氏的磷酸酶抑制劑）應(yīng)在使用前加入裂解緩沖液。
2. 裂解液的選擇要根據(jù)下游實(shí)驗(yàn)來決定，變性裂解液適合用于 SDS-PAGE，WB 實(shí)驗(yàn)，天然裂解液適合用
于 ELISA，IP，CO-IP 等實(shí)驗(yàn)。
3. 使用變性裂解液提取的蛋白，做 WB 上樣前，仍需和 loading buffer 混勻煮制樣品。
操作方法：
為實(shí)驗(yàn)操作方便建議大家按照采用推薦的樣品量和裂解液。本操作可以按照比例放大或者縮小。皮膚組織準(zhǔn)
備：對于具有皮毛/毛發(fā)的動(dòng)物皮膚，第一步是使用修剪器去除毛發(fā)/毛發(fā)。盡可能地去除皮下脂肪。
1.稱取 30-40mg（冷凍或新鮮）皮膚組織，用剪刀將組織剪成 1x1mm 的小塊或者更小一些。將樣品轉(zhuǎn)移到離
心管柱中待用。
2.加入 50-80mg 蛋白研磨粉覆蓋組織樣品，加入 100ul 裂解液。
3.立刻用塑料研磨棒按住組織扭轉(zhuǎn)研磨 2-3min，將剩余的 100ul 裂解液加入，繼續(xù)研磨 30s-1min。注意：塑料
研磨棒可以重復(fù)使用，用 70%的酒精徹底沖洗干凈，用紙巾擦干。
4.蓋上蓋子，臺式離心機(jī)最高轉(zhuǎn)速離心 1min，棄掉離心管柱。收集管中的上清就是提取的總蛋白，將其轉(zhuǎn)移
到一個(gè)新管中。上清的上層可能會(huì)有一層薄薄的油脂層，可以用吸頭穿過油脂層吸取上清，管底的白色沉淀
是穿過柱子的蛋白研磨粉，棄掉即可。
應(yīng)用提示：如果最終的蛋白質(zhì)產(chǎn)量低，在步驟 3 中，在室溫下將研磨的組織孵育 5-10 分鐘。在孵育期
間，裂解緩沖液可能滴入收集管。這是正常的，不影響提取的蛋白質(zhì)的質(zhì)量。
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