精子核 DNA 染色液(AO 法)
正常情況下與精核 DNA 結(jié)合的堿性蛋白(核蛋白)將經(jīng)歷從組蛋白到魚(yú)精蛋白的自然成
熟過(guò)程，這種成熟后的魚(yú)精蛋白對(duì)精子基因(DNA)具有特殊保護(hù)作用，組蛋白被魚(yú)精蛋白逐漸
取代的過(guò)程，稱(chēng)之為精子核蛋白組型轉(zhuǎn)換，這種組型轉(zhuǎn)換具有重要的生理意義。精子核攜帶著
全部來(lái)自父方的遺傳信息，這些基因必須在受精后才能開(kāi)始表達(dá)，受精前精子基因在魚(yú)精蛋白
的特殊保護(hù)下緊密濃集，無(wú)任何 DNA 轉(zhuǎn)錄作用。但當(dāng)核蛋白組型轉(zhuǎn)換異�？梢鹉行圆挥�
或胚胎早期夭折流產(chǎn)，其機(jī)理為：①精子 DNA 不穩(wěn)定且易受損傷而難以受孕；②一旦受
精，由于核蛋白組型異常，精子核不能正常解聚，從而影響了雌雄原核的融合；③胚胎不能正
常發(fā)育，造成胚胎夭折而流產(chǎn)。
正常精子核約占其頭部的 65％，由結(jié)合蛋白的 DNA 構(gòu)成，精子核DNA 染色液(AO 法)
作用原理是熒光染料吖啶橙與雙鏈 DNA 結(jié)合發(fā)出綠色熒光，與單鏈 DNA 結(jié)合后可發(fā)出紅
色或黃色熒光，通常有雙鏈 DNA 的精子才能有受精能力。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不適用
于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成：
編號(hào)
名稱(chēng)
DA1210
20T
Storage
試劑(A): 洗滌液
100ml
RT
試劑(B): 固定液
50ml
RT 避光
試劑(C): AO 染色液
1ml
4℃ 避光
試劑(D): AO Buffer
5ml
4℃
試劑(E): 抗熒光淬滅封片劑
5ml
4℃ 避光
說(shuō)明書(shū)
1 份
自備材料：
1、蒸餾水
2、新鮮精液樣本
3、 EP 管或離心管
4、恒溫箱
5、防脫載玻片操作步驟(僅供參考)：
1、取新鮮精液標(biāo)本，置于恒溫箱
37℃或常溫放置，至完全液化。
2、取上述液化精液 0.2~0.5ml 置于 EP 管，再加入 1~1.5ml 洗滌液，用吸管或移液器反復(fù)
吹打數(shù)次，室溫 2000rpm 離心 5~10min，棄去上清液，保留管底精子沉淀團(tuán)，重復(fù)操作
1~2 次。
3、向精子沉淀加入洗滌液約
0.05~0.2ml，制成混合精子懸液。
4、取上述已制備好的精子懸液
15~100μl，均勻涂布于防脫載玻片，自然干燥。
5、在涂片區(qū)內(nèi)滴加固定液 2~3 滴，室溫固定 10~15min，蒸餾水稍洗，并甩去多余水分。
6、配制 AO 染色工作液：按 AO 染色液：AO Buffer=1：4 的比例混合，即為 AO 染色工
作液，注意該工作液應(yīng)即配即用，不宜久置。
7、在涂片區(qū)內(nèi)滴加 AO 染色工作液 2~4 滴，室溫染色 5min，蒸餾水稍洗，并甩去多余水
份。
8、吹干或晾干玻片，滴加 2~4 滴抗熒光淬滅封片劑，熒光顯微鏡下觀察。
結(jié)果：
注意事項(xiàng)：
1、蒸餾水沖洗載玻片時(shí)要注意控制水流速度，以免洗脫涂片區(qū)內(nèi)的精子。
2、甩去多余水分，應(yīng)防止涂片過(guò)于干燥。
3、配制的 AO 染色工作液應(yīng)即配即用，不宜久置，否則熒光會(huì)衰減，如果熒光明顯衰減可
提高 AO 染色液：AO Buffer=1：4 配制比例，以達(dá)到較好的效果。
4、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期：6 個(gè)月有效；4℃運(yùn)輸，4℃保存。
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