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DPPH自由基清除率檢測試劑盒(比色法)

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DPPH自由基清除率檢測試劑盒(比色法)

 

一、產(chǎn)品簡介:

在生命活動的代謝過程中不斷產(chǎn)生各種自由基而自由基的積累會使機體產(chǎn)生氧化損傷而引起衰老、腫瘤、中風、心肌炎和糖尿病等慢性疾病,在眾多自由基中2,2-二苯基-1-苦基苯肼( DPPH)是一種較穩(wěn)定的自由基,當有自由基清除劑存在時顏色由紫色向黃色轉(zhuǎn)變,吸光度隨之變小。

雅吉生物 DPPH自由基清除率檢測試劑盒(比色法)又稱氮自由基清除能力檢測試劑盒或氮自由基清除率檢測試劑盒,其檢測原理是DPPH自由基是一種較穩(wěn)定的含氮自由基,含一個單電子,溶于乙醇后溶液呈紫色,在517nm下有強吸收,如果有其他物質(zhì)提供一個電子與此單電子配對,溶液會褪色,褪色程度與接受電子的量呈正比,通過吸光度下降的程度來反應樣品的氮自由基清除能力,主要用于檢測血清、植物組織、抗氧化類食品、保健品及藥品等樣本。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。

二、產(chǎn)品組成:

名稱規(guī)格

100T

存儲

試劑(A): 氮自由基提取液

100ml

RT

試劑(B): DPPH溶液

100ml

4℃避光

試劑(C): 維生素C

10mg

4℃

使用說明書

一份

 

三、自備材料:

1、蒸餾水、無水乙醇

2、實驗材料∶植物組織(芹菜、綠豆、玉米等葉片)、血液、組織樣本等

3、研缽或勻漿器或粉碎機或超聲破碎機

4、離心機、離心管

5、恒溫水浴鍋、恒溫干燥箱

6、電子天平、30~50目篩

7、分光光度計、比色皿

 

四、操作步驟(僅供參考)

1、準備樣品∶

①植物樣品∶取新鮮植物樣本,清洗干凈,研缽研碎(粉碎),干燥箱烘干后過篩,稱取0.05g 樣品,加入0.8ml氮自由基提取液,40℃水浴浸提30~60min,10000rpm離心10min,上清液待用,4℃保存?zhèn)溆?亦可參考相關(guān)資料提取方法提取)。

②血漿、血清和尿液樣品︰血漿(用肝素或枸櫞酸鈉抗凝,不宜使用EDTA 抗凝)4°℃5000rpm離心10min,取上清液待用;血清或尿液樣品可直接測定。

③細胞樣品︰按每5×10°個細胞加入0.8ml氮自由基提取液,超聲破碎(功率200W,超聲3s,間隔10s,重復30次),10000rpm 離心10min,取上清液待用。

④果汁、葡萄酒等樣品︰按樣品∶氮自由基提取液=1∶9的比例震蕩混勻,10000rpm離心10min,上清液待用,4℃保存?zhèn)溆谩?/span>

⑤高活性樣品︰如果樣品中有效濃度較高,可用提取液進行恰當?shù)南♂尅?/span>

2、配制維生素C溶液︰將一支10mg維生素C充分溶解于1ml氮自由基提取液中,即成10mg/ml維生素C溶液;可分成0.1ml的小份,-20℃保存。

3、配制Vc標準工作液︰如需測線性關(guān)系,建議用氮自由基提取液將10mg/ml維生素C溶液稀釋至20、15、10、8、6、4、2μg/ml的Vc標準工作液;如需清除率約為100%的陽性對照,建議選用大于 30μg/ml 的Vc標準工作液。

4、分光光度計開機預熱 30min,調(diào)節(jié)波長517nm(500~530nm亦可),無水乙醇調(diào)零。

5、DPPH加樣∶按照下表設(shè)置空白管、樣本測定管、樣本對照管、陽性對照管,溶液應按照順序依次加入,混勻,室溫避光靜置30min。

 

加入物(ml)

空白管

樣本測定管

樣本對照管

陽性對照管(標準管)

氮自由基提取液

0.2

上清液

0.2

0.2

VC標準工作液

0.2

無水乙醇

0.9

0.9

1.8

 0.9

DPPH溶液

0.9

0.9

 0.9


6、OD值測定∶將各管溶液依次加入到比色皿中,用分光光度計檢測各管吸光度值,依次記為A0A1、A2A3。

 

五、計算:

陽性對照·DPPH清除率(%)= (A0- A3)/A0×100%

待測樣本·DPPH清除率(%)=[A0-( A1- A2)]/A0×100%

備注:

A0=空白管的吸光度值

A1=樣本測定管的吸光度值

A2=樣本對照管的吸光度值

A3=陽性對照管的吸光度值

 

六、注意事項:

1、正式測定之前建議選擇2~3個預期差異較大的樣本做預實驗。

2、實驗材料應盡量新鮮,當天提取當天測定。

3、不同樣本清除DPPH自由基的能力差異很大。

4、如樣本DPPH清除率大于90%,應用提取液稀釋;如樣本 DPPH清除率小于5%,應提高樣本用量以提高有效成分濃度。

5、樣品中不宜添加Triton、DTT等可能影響氧化還原反應的成分。

6、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

七、有效期:6 個月有效。4℃運輸,4℃保存。

 

 

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