H9細(xì)胞完全培養(yǎng)基

貨號(hào)：H9Med-001

規(guī)格：500mL

儲(chǔ)存條件：基礎(chǔ)培養(yǎng)基2 ~ 8℃，添加劑-80 ~ -20℃；混勻后2 ~ 8℃，2周內(nèi)使用完畢。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

H9細(xì)胞培養(yǎng)基是雅吉生物開(kāi)發(fā)出的一種適用于無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)、化學(xué)成分明確、并且不含動(dòng)物源蛋白的人多潛能干細(xì)胞（hESC/hiPSC）完全培養(yǎng)基。H9細(xì)胞培養(yǎng)基是在James Thomson實(shí)驗(yàn)室開(kāi)發(fā)的Essential 8培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，改良研發(fā)出的最新型多潛能干細(xì)胞完全培養(yǎng)基。hESC/hiPSC在H9細(xì)胞培養(yǎng)基中可以快速增殖，而分化的細(xì)胞則無(wú)法在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，從而選擇性擴(kuò)增并獲得高純度多潛能干細(xì)胞。

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑準(zhǔn)備：

H9細(xì)胞完全培養(yǎng)基：將H9細(xì)胞添加劑加入H9細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中形成H9細(xì)胞完全培養(yǎng)基（推薦每2mL添加劑與50mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基混合）。

H9細(xì)胞完全培養(yǎng)基可在2-8℃穩(wěn)定儲(chǔ)存2-3周。

疑難解答：

•是否還需要往H9細(xì)胞完全培養(yǎng)基中補(bǔ)充或添加成分？

不需要。H9細(xì)胞培養(yǎng)基中各個(gè)成分的質(zhì)量和濃度都經(jīng)過(guò)了最優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，完全支持人ESC/iPSC的長(zhǎng)期培養(yǎng)，您無(wú)需再自行添加。

•培養(yǎng)基中有沉淀狀物質(zhì)是否是質(zhì)量問(wèn)題？

添加劑在解凍過(guò)程中，若有少量沉淀析出，屬于正�，F(xiàn)象，不影響使用，請(qǐng)充分混勻后與基礎(chǔ)培養(yǎng)基混合。但添加劑不能在37℃解凍，否則會(huì)析出大量沉淀，影響培養(yǎng)基的效價(jià)。如果培養(yǎng)基中出現(xiàn)大量沉淀，請(qǐng)不要使用。

•是否能在37 ℃反復(fù)水浴H9細(xì)胞完全培養(yǎng)基？

不能。頻繁地在4℃和37℃之間轉(zhuǎn)換會(huì)導(dǎo)致H9細(xì)胞完全培養(yǎng)基中含有的因子失活，H9細(xì)胞完全培養(yǎng)基在使用前平衡至室溫即可。

• H9細(xì)胞在傳代后不貼壁怎么解決？

造成H9傳代后不貼壁的最可能的原因：

① 細(xì)胞消化時(shí)間不合適；②消化后吹打次數(shù)不合適，使得完成傳代后細(xì)胞集落過(guò)大或過(guò)小。

• H9分化怎么處理？

① 細(xì)胞在剛復(fù)蘇或傳代時(shí)，小的細(xì)胞團(tuán)不呈現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)的克隆形態(tài)，培養(yǎng)幾天或傳代后可恢復(fù)。②如果H9分化的表現(xiàn)為干細(xì)胞克隆形態(tài)良好，克隆周邊出現(xiàn)散在的分化細(xì)胞，可通過(guò)高比例傳代（≥1:10），使得分化細(xì)胞的密度減少，低密度的分化細(xì)胞可被H9培養(yǎng)體系篩選去除，如未完全去除，可用細(xì)胞刮或巴斯德管刮除。

② 如果H9分化的表現(xiàn)為克隆內(nèi)部松散，邊緣不平滑，在分化比例小或分化不嚴(yán)重的情況下，可通過(guò)連續(xù)傳代2 ~ 3次恢復(fù)，如果分化嚴(yán)重，建議棄除。

• 細(xì)胞復(fù)蘇率低是什么原因？

細(xì)胞復(fù)蘇需使用H9細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)基，可大大提高細(xì)胞的復(fù)蘇效率。復(fù)蘇過(guò)程中，轉(zhuǎn)移細(xì)胞、吹打混勻和重懸細(xì)胞時(shí)，吹打力度要輕柔，并盡量減少吹打次數(shù)，細(xì)胞接種后，即刻在顯微鏡下觀察細(xì)胞團(tuán)塊的大小，4 ~ 10個(gè)細(xì)胞的團(tuán)塊為最佳。如果吹打力度過(guò)大或次數(shù)過(guò)多，

導(dǎo)致細(xì)胞分散成單細(xì)胞，細(xì)胞復(fù)蘇率將偏低。

H9細(xì)胞鋪底工作液

貨號(hào)：H9Med-CA006

規(guī)格：100mL

儲(chǔ)存條件：基礎(chǔ)培養(yǎng)基2 ~ 8℃，添加劑-20℃；2 ~ 8℃解凍，禁止反復(fù)凍融。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

H9細(xì)胞鋪底工作液是使用基質(zhì)膠配制好的即用型工作液，可以為人胚胎干細(xì)胞（ES）無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)（feeder-free culure）提供理想的底物支持。與H9細(xì)胞完全培養(yǎng)基聯(lián)合使用，可以穩(wěn)定維持人ES在體外培養(yǎng)的多潛能性、快速增殖能力和正常的核型。

產(chǎn)品內(nèi)容：

H9細(xì)胞鋪底工作液-添加劑分裝：

1. 提前一天在4℃冰箱中解凍H9細(xì)胞鋪底工作液-添加劑，

2. 提前準(zhǔn)備無(wú)菌干燥的移液管或槍頭，EP管置于-20℃冰箱預(yù)冷，

3. 將化凍的H9細(xì)胞鋪底工作液-添加劑，置于冰上放入生物安全柜，

4. 用預(yù)冷的移液管或槍頭將H9細(xì)胞鋪底工作液-添加劑按1mL/支分裝到EP管中，并放入-20℃保存。

工作液配制：

1. 取分裝好的1mL H9細(xì)胞鋪底工作液-添加劑放入4℃冰箱解凍，

2. 30min后，將解凍的H9細(xì)胞鋪底工作液-添加劑加入到9mL基礎(chǔ)液中，并充分混勻，

3. H9細(xì)胞鋪底工作液推薦使用量：

4. H9細(xì)胞鋪底工作液完全覆蓋瓶/皿底，置于37℃培養(yǎng)箱2h或過(guò)夜。

5. 細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)，在鋪瓶/皿前，需將鋪底工作液吸出。

 Y27632說(shuō)明書(shū)

貨號(hào)：H9Med-CA005

規(guī)格：1mg（10mM）

儲(chǔ)存條件：-20ºC

產(chǎn)品描述:

獨(dú)家引進(jìn)，可以阻止人胚胎干細(xì)胞（hES）因分離誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，在不影響hES的自我更新或者多潛能特性的前提下改善分離的hES細(xì)胞的存活率和克隆效率。

建議將該溶液1000倍稀釋（10μM濃度）加入H9細(xì)胞完全培養(yǎng)基，混合均勻。

建議分裝后-20ºC避光保存，避免反復(fù)凍存，至少可存放6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

♦本產(chǎn)品為化學(xué)試劑對(duì)人體可能有害，請(qǐng)做好安全防護(hù)工作，避免直接接觸皮膚。

♦本產(chǎn)品僅用于科研用途，禁止用于人身上。

H9細(xì)胞消化液

貨號(hào)：H9Med-CA003         

規(guī)格： 500mL           

儲(chǔ)存條件：2 ~ 8 ℃

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

H9細(xì)胞消化液可以應(yīng)用于非飼養(yǎng)層依賴的H9傳代，該工作液屬于非酶類溫和消化液，對(duì)細(xì)胞損傷小且消化時(shí)間適中便于操作，是一種已被普遍使用的消化液，可與H9培養(yǎng)基搭配使用。

操作說(shuō)明：

1. 將H9完全培養(yǎng)基取出并平衡至室溫，取出包被過(guò)Matrix的培養(yǎng)皿/瓶，吸去包被液并加入適量完全培養(yǎng)基，置于5% CO₂的37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中。

2. 吸走待傳代細(xì)胞培養(yǎng)皿/瓶中的iPS完全培養(yǎng)基，并且加入無(wú)鈣鎂的PBS溶液洗一次。

3. 加入0.5mM EDTA傳代工作液使之完全覆蓋皿/瓶底。

4. 室溫放置5 ~ 8 min或37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育3 ~ 5 min，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開(kāi)始脫離皿/瓶底，克隆內(nèi)部大部分細(xì)胞間出現(xiàn)間隙但尚未相互分離，肉眼觀察到細(xì)胞集落變得不透明且發(fā)白，表明細(xì)胞消化時(shí)間理想。

5. 吸去傳代工作液，即刻加入新鮮的H9完全培養(yǎng)基，用移液器扇形吹打培養(yǎng)皿/瓶底，使皿/瓶底貼附的干細(xì)胞集落脫落，輕柔緩慢吹吸混勻。

  注：吹吸的力度要輕柔，吹打脫落和吹吸混勻的次數(shù)總共不超過(guò)10次為宜。吹打過(guò)度導(dǎo)致大量單細(xì)胞出現(xiàn)是造成細(xì)胞分化或死亡的重要原因。

  注：如有少量細(xì)胞無(wú)法從皿底脫落，屬于正�，F(xiàn)象。如有大量細(xì)胞無(wú)法從皿底脫落，需延長(zhǎng)消化時(shí)間。

6. 顯微鏡下觀察細(xì)胞呈4 ~ 20個(gè)細(xì)胞大小的團(tuán)塊，水平十字搖勻。

7. 將細(xì)胞置于5% CO₂的37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

8. 每天換液直至達(dá)到可以傳代的標(biāo)準(zhǔn)。