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注 意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
MDHAR 催化 MDHA 還原生成 AsA，在抗壞血酸氧化還原代謝中具有重要作用。
測(cè)定原理：
MDHAR 催化 NADH 還原 MDHA 生成 AsA 和 NAD+，NADH 在 340 nm 有特征吸收峰，但是 NAD+沒(méi)有。通過(guò)測(cè)定 340 nm 光吸收下降速率，來(lái)計(jì)算出 MDHAR 活性。
實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備：
研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍和雙蒸水
試劑組成和配置：
試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 20mL×1 瓶，室溫保存。
試劑三：粉劑×1 瓶（棕色），4℃保存。臨用前加入 3 mL 蒸餾水充分溶解。
試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 2.5 mL 蒸餾水充分溶解。
試劑五：液體 15μL×1 瓶，4℃保存。臨用前加 3 mL 試劑二充分溶解。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測(cè)。
2.. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建
議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；8000g ，4℃離心 20min，取上清液置冰上混勻待測(cè)。
3. 血清等液體：直接測(cè)定。
MDHAR 測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在 25℃水浴鍋中預(yù)熱 30 min。
3.依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 試劑三、20μL 試劑四、20μL 試劑五和 120μL 試劑二，最后加入 20μL 上清液，迅速混勻后于 340nm 比色，記錄 30s 和 150s 的吸光值 30s
和 150s 的吸光值 A1 和 A2，△A=A1-A2。
MDHAR 活性計(jì)算公式：
a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
