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馬伊氏錐蟲(chóng)(T.evans)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

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 馬伊氏錐蟲(chóng)(T.evans)酶聯(lián)免疫分析

試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

 

本試劑盒僅供研究使用。

 

96T

 

使用目的:

本試劑盒用于測(cè)定馬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中伊氏錐蟲(chóng)(T.evans)表達(dá)。

實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中馬伊氏錐蟲(chóng)(T.evans)表達(dá)。用純化的抗體包被微孔 板,制成固相抗體,可與樣品中伊氏錐蟲(chóng)(T.evans)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和 他成后再與 HRP 標(biāo)記的抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加 底物 TMB 顯色。TMB  HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。 用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度 (OD ) ,與 CUTOFF 值相比較,從而判定標(biāo)本中馬 錐蟲(chóng)(T.evans)的存在與否。

劑盒組成

 

1

30 倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止

6ml×1

2

標(biāo)試劑

6ml×1

8

陽(yáng)性對(duì)照

0.5ml×1

3

標(biāo)包被板

12 ×8

9

性對(duì)照

0.5ml×1

4

品稀釋液

6ml×1

10

說(shuō)明書(shū)

1 

5

顯色劑 A 

6ml×1

11

封板膜

2

6

顯色劑 B

6ml×1/

12

封袋

1 個(gè)

標(biāo)本要求

1 .標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不 馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測(cè)含NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的 (HRP) 活性

操作步

1.     編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2 孔、陽(yáng)性對(duì)照2 孔、空白對(duì)照 1  (空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)

2.     加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50μl 。然后在待測(cè)樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl ,然后再加待測(cè)樣品 10μl 。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不 及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,

3.     溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.     配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.     洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復(fù) 5 次,拍干。

6.     加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl ,空白孔除外。

7.     溫育:操作同 3。

8.     滌:操作同 5。

9.     顯色:每先加入顯色劑 A50μl ,再加入顯色劑 B50μl ,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色


10 分鐘.

10.   終止每孔加終止液 50μl ,終止反應(yīng) (此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.   測(cè)定:以空白孔調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度 (OD ) 。  測(cè)定應(yīng)在加終止

液后 15 分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

計(jì)算和結(jié)果判定:

試驗(yàn)效性:陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00;  陰性對(duì)照平均值≤0.20

(CUT OFF) 計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0. 15

陰性判定:樣品 OD <  臨界值 (CUT OFF) 者為伊氏錐蟲(chóng)(T.evans) 陽(yáng)性判定:樣品 OD ≥  臨界值 (CUT OFF) 者為伊氏錐蟲(chóng)(T.evans)陽(yáng)

。

意事項(xiàng)

1 操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

2 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未 完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3 .濃滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

4  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5 .底物請(qǐng)避光保存。

6 試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),參考波長(zhǎng)為 630nm

7 有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,使用時(shí)必須 注意安全。

存條件及有效期

1 .試劑盒保存:;2-8。

2 .有效期:6 個(gè)月

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