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多酚氧化酶(PPO)試劑盒

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     意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:                           

PPOEC1.10.3.1)主要存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是一種含銅的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化產(chǎn)生醌,從而引起褐化,與果蔬加工、茶葉品質(zhì)和組培等密切相關。

 

測定原理:

PPO能夠催化鄰苯二酚產(chǎn)生醌,后者在525nm有特征光吸收。

 

自備的儀器和用品

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰蒸餾水

 

試劑組成和配制

提取液:液體,60mL×1瓶,4保存;

試劑一:液體,40mL×1瓶,4保存;

試劑二:液體,10mL×1瓶,4保存;

 

粗酶液提取

1、細菌、細胞或組織樣品的制備:

細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質(zhì)量(g:提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)或果汁樣本的處理:

按照血清(漿)或果汁體積(mL:提取液體積(mL)15~10的比例(建議0.1mL血清(漿)或果汁加入1mL提取液,進行冰浴勻漿。8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

 

測定步驟:

1、 分光光度計預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至525nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 樣本測定(在EP管中依次加入下列試劑)

試劑名稱(μL

測定管

對照管

樣本

180

 

煮沸的樣本

 

180

試劑一

720

720

試劑二

180

 

蒸餾水

 

180

37(哺乳動物)25(其它物種)中準確水浴10min后,95水浴5min

充分混勻,10000g,25℃離心10min,取上清,525nm處檢測測定管和對照管吸光度。ΔA=A測定管-A對照管。

注意:煮沸樣本的操作:取300μL離心上清于EP管中,進行5min 95水浴處理;每個測定管需要設一個對照管,可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液,然后集中進行5min 95水浴處理。

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