植物銨態(tài)氮試劑盒說明書
分光光度法50管/48樣
注 意: 正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
氮素是構(gòu)成生物體的一種必需元素,自然界中的氮素循環(huán)包括許多轉(zhuǎn)化作用?諝庵械牡?dú)獗还痰⑸锛爸参锱c微生物的共生體固定成氨態(tài)氮,經(jīng)過硝化微生物的作用轉(zhuǎn)化成硝態(tài)氮,后者被植物或微生物同化成有機(jī)氮化物,植物組織氨氮含量可反映植物受脅迫的程度。
測定原理
α-氨基酸與水合茚三酮溶液一起加熱,經(jīng)氧化脫氨變成相應(yīng)的α-酮酸,酮酸進(jìn)一步脫羧變成醛,水合茚三酮則被還原,在弱酸環(huán)境中,還原型茚三酮,氨和另一分子水合茚三酮反應(yīng), 縮合生成藍(lán)紫色物質(zhì),在580nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、研缽、常溫離心機(jī)、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體15mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1支,4℃避光保存。臨用前加0.5mL蒸餾水充分溶解。
試劑三:液體25mL×1瓶,4℃保存。
樣本處理
按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,室溫勻漿后于25℃,12000g離心10min,取上清待測。
測定操作表
| 空白管 | 測定管 |
樣本(μL) |
| 200 |
蒸餾水(μL) | 200 |
|
試劑一(μL) | 300 | 300 |
試劑二(μL) | 10 | 10 |
充分混勻,沸水浴5min后自然冷卻10min | ||
試劑三(μL) | 500 | 500 |
充分混勻,于1mL玻璃比色皿,蒸餾水調(diào)零,測定580nm處吸光值A,分別記為A空白管和A測定管,△A=A測定管-A空白管 |
注意:空白管只需測定一次。
計算公式
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=0.1535x-0.0279,R2=0.999NH4+—N含量(μg/g 鮮重)=(△A+0.0279)÷ 0.1535×V反總÷(W×V樣÷V樣總)
= 32.9×(△A+0.0279)÷W
V反總:反應(yīng)總體積,1.01mL;V樣:反應(yīng)體系中加入樣本體積,0.2mL;V樣總:加入提取液體積,1mL,W:樣本質(zhì)量,g
注意事項
1. 提取好的待測液盡快測定,低溫保存不得超過24小時。
2. 沸水浴時間不宜過長,否則會對測定結(jié)果有影響。
3. 顯色后20min內(nèi)完成測定。
4. 最低檢出限為18μg/g。