細胞周期(cell cycle)是指連續(xù)分裂細胞從一次有絲分裂結束到下一次有絲分裂結束所經(jīng)歷的整個過程。在這個過程中,細胞遺傳物質復制并加倍,且在分裂結束時平均分配到兩個子細胞中去。細胞周期又可以分為間期(interphase)和有絲分裂期(M phase),細胞間期又常劃分為休眠期(G0),DNA合成前期(G1),DNA合成期(S),DNA合成后期(G2),整個周期可表示為G1→S→G2→M。DNA周期檢測可用來反應細胞周期的各個期的狀況,即細胞增殖狀況。利用細胞內DNA能夠和熒光染料(如碘化丙啶--PI)結合的特性,細胞各個時期其DNA含量不同從而結合的熒光染料不同,流式細胞儀檢測的熒光強度也不一樣(如下圖所示)。PI-DNA復合物的最大激發(fā)波長為535 nm,最大發(fā)射波長為615 nm,PI的紅色熒光在 FL2或 FL3 通道檢測。每個樣采集 20000~30000events。本試劑盒經(jīng)過優(yōu)化的配方,可獲得絕佳的周期結果,可應用于培養(yǎng)細胞(懸浮、貼壁)的 DNA含量(細胞周期)檢測。 | ||||||||
組分 | ||||||||
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應用 | ||||||||
細胞周期檢測 | ||||||||
儲存 | ||||||||
2~8℃,有效期1年。 | ||||||||
注意事項 | ||||||||
1. 乙醇固定后,細胞的吹打要輕柔,否則會導致細胞大量破碎。 2. 離心過程中盡可能采用吸取上清的方式,防止細胞大量丟失。 3. 無水乙醇要事先凍存于-20℃。 4. 試驗操作過程中佩戴手套等防護用品。 | ||||||||
實例 | ||||||||
圖:將融合度90%的A549細胞細胞分兩組,一組作為對照組正常培養(yǎng),另一組向培養(yǎng)基中加入終濃度為5mM的喜樹堿處理24h后收集細胞,用細胞周期檢測試劑盒()處理后上流式細胞儀檢測,ModFit軟件分析,結果如圖。結果表明:實驗組經(jīng)過喜樹堿處理后S期明顯高于對照組,說明喜樹堿處理后明顯抑制了A549細胞的增殖,數(shù)據(jù)CV值RCS值很小,試劑盒檢測效果良好。 |
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