| 熱穩(wěn)定無(wú)機(jī)焦磷酸酶純化自重組 E. coli 菌株，攜帶從極度耐熱的 Thermococus litoralis 中克隆的無(wú)機(jī)焦磷酸酶基因。該焦磷酸酶催化無(wú)機(jī)焦磷酸鹽水解生成正磷酸鹽。 P207–4 + H20 →2HP04–2。該酶在100℃加熱4h仍然具有100%活性，因此可用于PCR反應(yīng)，解除生成的無(wú)機(jī)焦磷酸鹽對(duì)PCR的抑制，增強(qiáng)DNA的復(fù)制。 | ||||||
組分 | ||||||
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活性定義 | ||||||
| 1單位指標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件下：0.5ml反應(yīng)體系，50mM Tricine pH8.5，1mM MgCl2和0.32mM PPi，75℃反應(yīng)10 鐘，每分鐘催化無(wú)機(jī)焦磷酸鹽生成1μmol 磷酸鹽的酶量。 | ||||||
儲(chǔ)存 | ||||||
| -20℃可保存3年。 | ||||||
使用注意事項(xiàng) | ||||||
| （1） 該酶在多種反應(yīng)Buffer中均具有活性，通常該酶在tHDA擴(kuò)增、PCR、測(cè)序反應(yīng)等實(shí)驗(yàn)中，可直接接入即可。 （2） 該酶的用量在不同的實(shí)驗(yàn)中需要優(yōu)化，通常在5~50U/ml濃度調(diào)整。 （3） 該酶不可以熱失活。 | ||||||
實(shí)例 | ||||||
 Fig:以Bst2.0擴(kuò)增的LAMP產(chǎn)物作為底物，分別應(yīng)用不同量的熱穩(wěn)定無(wú)機(jī)焦磷酸酶在65℃作用1h，肉眼觀察管內(nèi)變化。管1為不加Bst 2.0 DNA 聚合酶的LAMP產(chǎn)物，管2為Bst 2.0 DNA聚合酶的LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物，管3-7為在管2產(chǎn)物中分別加入不同量熱穩(wěn)定無(wú)機(jī)焦磷酸65℃作用1h的產(chǎn)物。其中管3-7加入的焦磷酸酶的量分別為：0.1μl、0.25μl、0.5μl、0.75μl和1μl。 | ||||||
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