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酵母焦磷酸酶

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無機(jī)焦磷酸酶(酵母)純化自重組 E. coli 菌株,攜帶有從釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)克隆的 ppa 基因和蟾分枝桿菌(Mycobacterium xenopi)GyrA 內(nèi)含肽的融合基因。該焦磷酸酶催化無機(jī)焦磷酸鹽水解生成正磷酸鹽:P207–4 + H20 →2HP04–2。在核酸擴(kuò)增實驗中,其可解除生成的無機(jī)焦磷酸鹽對反應(yīng)體系的抑制。

組分

組分名稱 數(shù)量
Yeast Pyrophosphatase (0.1 U/μl) 200 μl/1 ml

應(yīng)用

  • 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中提高 RNA 產(chǎn)量
  • 增強(qiáng) DNA 復(fù)制

活性定義

1 單位指標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件下(20mM Tris-HCl,pH 7.5,2mM MgCl2,2mM PPi,25℃ 反應(yīng) 10 分鐘)每分鐘催化無機(jī)焦磷酸鹽生成1μmol 磷酸鹽所需的酶量。

儲存

-20℃可保存3年。

使用注意事項

(1) 該酶在多種反應(yīng)Buffer中均具有活性,通常該酶在HDA擴(kuò)增、LAMP擴(kuò)增等實驗中,可直接接入即可。
(2) 該酶的用量在不同的實驗中需要優(yōu)化,通常在0.05~1U/ml濃度調(diào)整。
(3) 該酶的最佳反應(yīng)溫度為25℃,其在16~37℃均有活性,65℃ 10min可使該酶失活。
 
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