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9N (exo-) DNA聚合酶

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9N (exo-) DNA Polymerase 9N DNA聚合酶中的突變體,具有較強(qiáng)的摻入修飾底物的能力,如:ddNTP、rNTP 和acyNTP,因此其適用于核糖核酸置換法DNA測(cè)序、ddNTP或acyNTP的鏈終止法測(cè)序或SNP分析。該酶來源于E. coli菌株,此菌株含有從Thermococcus species 9°N-7 中克隆的經(jīng)過基因工程改造的9°N (D141A/E143A/A485L) DNA聚合酶基因。

主要特征和應(yīng)用

  • 提高了修飾核苷酸的摻入能力
  • 部分核糖核酸置換法測(cè)定 DNA 序列
  • ddNTP 或 acyNTP 的鏈終止法用于測(cè)序或 SNP 分析

組分

組分名稱 數(shù)量
9N (exo-) DNA Polymerase (2 U/μl) 250 μl
10×HG PCR Buffer 6 1 ml×2

單位定義

一個(gè)活力單位即在在74°C條件下,30分鐘內(nèi)催化10 nmol dNTP的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量。

儲(chǔ)存

-20℃可保存3年。

使用方法

按下表配制反應(yīng)液:
9N (exo-) DNA Polymerase (2 U/μl)            1.25 μl
10×HG PCR Buffer 6                                         5 μl
dNTP Mixture (2.5 mM each)                            2 μl
模板DNA                                                               X
Primers(10 μM)                                   0.25~1 μl
ddH2O                                                   Up to 50 μl
*1模板DNA用量參數(shù)(50 μl反應(yīng)體系):Genomic DNA 100-1000 ng ; Plasmid DNA 5-30 ng ; cDNA from RT reaction 1-5 μl
PCR擴(kuò)增循環(huán)參數(shù) 
循環(huán)數(shù) 溫度 時(shí)間
1st Cycle 95°C 2min
25-35 Cycles 95°C 20s
Tm 20s
72°C 0.5kb/min
Last Cycle 72°C 2min
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