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T7 RNA聚合酶

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Hi T7 RNA 聚合酶對T7噬菌體啟動子具有高度的特異性,并可以其作為啟動子,DNA作為模板體外合成正義鏈RNA。線性質(zhì)粒、PCR產(chǎn)物雙鏈DNA均可作為T7 RNA 聚合酶的底物模板。Hi T7 RNA聚合酶經(jīng)電子重構(gòu)架及庫篩選,與Wild型相比,該酶的DNA模板結(jié)合區(qū)域親和力更高,使其具有持續(xù)合成能力,從而獲得更高的產(chǎn)量,并易于長片段RNA的合成。
Hi T7高產(chǎn)RNA合成試劑盒是基于Hi T7 RNA聚合酶而組建的試劑盒,20 μl反應即可獲得150-200 μg的總產(chǎn)量(產(chǎn)量超過 MegaScript T7 Transcription kit)。利用該高產(chǎn)RNA試劑盒可在體外高效合成多種類型的 RNA,如mRNA、lncRNA、shRNA等。Hi T7 RNA聚合酶識別T7 promoter(TAATACGACTCA CTATA G G)以倒數(shù)第二個G堿基為起點開始轉(zhuǎn)錄,轉(zhuǎn)錄長度可達5000nt以上。利用該試劑盒得到的RNA適用于多種下游應用,如RNA結(jié)構(gòu)和功能研究、核酸酶生物化學研究、RNase保護分析探針、印跡雜交、反義 RNA 及 RNAi 實驗、微陣列分析、顯微注射、體外翻譯和 RNA 疫苗等。

應用

  • 制備放射標記的 RNA 探針
  • 合成用于體外翻譯的 RNA
  • 合成用于結(jié)構(gòu)、加工和催化性能研究的 RNA
  • 合成 RNA 反義鏈,調(diào)控基因表達

1X T7 Transcription Buffer

40 mM Tris (pH 7.8), 10 mM NaCl, 6mM MgCl2,2 mM Spermidine HCl, 10 mM DTT 。

酶儲存液

10 mM Tris-HCl, 0.1 M NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% Glycerol, 0.01% (w/v) Triton X-100 , pH 7.5。

儲存

-20°C可保存2年,避免反復凍融。

熱失活

75°C,10min。

實例

1.以不同大小的線性化質(zhì)粒作為模板進行體外轉(zhuǎn)錄。
T7 RNA聚合酶
2.以不同大小的PCR產(chǎn)物作為模板進行體外轉(zhuǎn)錄
T7 RNA聚合酶
 
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