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Poly(A)聚合酶 (E.coli)——加A聚合酶

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末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)是一種不依賴于模板的DNA聚合酶,催化脫氧核苷酸結(jié)合到DNA分子的3’羥基端。帶有突出、凹陷或平滑末端的單雙鏈DNA分子 均可作為TdT的底物,加尾長(zhǎng)度可達(dá)5~300nt。本酶經(jīng)電子重構(gòu)架技術(shù)篩選,使其可以在45°C高溫下反應(yīng),從而避免因DNA二級(jí)結(jié)構(gòu)造成的加尾效 率下降。優(yōu)化的活性中心結(jié)構(gòu),使其對(duì)模板底物結(jié)合能力更強(qiáng),底物加尾比例更高。該末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)廣泛用于DNA的3’末端添加同聚物、利用修飾堿基(如 ddNTP,DIGdUTP)標(biāo)記DNA 3’末端、TdT介導(dǎo)的dUTP 缺口末端標(biāo)記技術(shù)(細(xì)胞凋亡的原位檢測(cè))等試驗(yàn)。

組分

組分名稱 數(shù)量
Terminal Transferase (20 U/μl) 50 μl
10×TdT Buffer 1 ml

應(yīng)用

  • 寡核苷酸或DNA 3’羥基末端標(biāo)記
  • DNA末端加尾(DNA tailing)
  • 5’-RACE
  • 合成同一種脫氧核苷酸的寡聚鏈

活性定義

37℃  60分鐘內(nèi),催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3’羥基末端中所需的酶量定義為1個(gè)活性單位

儲(chǔ)存

-20℃可保存3年。

熱失活

75°C 20min。

注意事項(xiàng)

1、適量EDTA可使Terminal Transferase的活性喪失。
2、金屬離子螯合劑,較高濃度的銨根離子、氯離子、碘例子和磷酸根離子均對(duì)Terminal Transferase活性具有抑制作用。

功能測(cè)試

(該實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)自實(shí)驗(yàn)室,未經(jīng)允許,不得轉(zhuǎn)載)
1. TDT不同底物的加尾效率分析   2. 不同酶量和不同溫度下加尾長(zhǎng)度分析
 
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