末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)是一種不依賴于模板的DNA聚合酶,催化脫氧核苷酸結(jié)合到DNA分子的3’羥基端。帶有突出、凹陷或平滑末端的單雙鏈DNA分子 均可作為TdT的底物,加尾長(zhǎng)度可達(dá)5~300nt。本酶經(jīng)電子重構(gòu)架技術(shù)篩選,使其可以在45°C高溫下反應(yīng),從而避免因DNA二級(jí)結(jié)構(gòu)造成的加尾效 率下降。優(yōu)化的活性中心結(jié)構(gòu),使其對(duì)模板底物結(jié)合能力更強(qiáng),底物加尾比例更高。該末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)廣泛用于DNA的3’末端添加同聚物、利用修飾堿基(如 ddNTP,DIGdUTP)標(biāo)記DNA 3’末端、TdT介導(dǎo)的dUTP 缺口末端標(biāo)記技術(shù)(細(xì)胞凋亡的原位檢測(cè))等試驗(yàn)。 | |||||||||
組分 | |||||||||
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應(yīng)用 | |||||||||
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活性定義 | |||||||||
37℃ 60分鐘內(nèi),催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3’羥基末端中所需的酶量定義為1個(gè)活性單位 | |||||||||
儲(chǔ)存 | |||||||||
-20℃可保存3年。 | |||||||||
熱失活 | |||||||||
75°C 20min。 | |||||||||
注意事項(xiàng) | |||||||||
1、適量EDTA可使Terminal Transferase的活性喪失。 2、金屬離子螯合劑,較高濃度的銨根離子、氯離子、碘例子和磷酸根離子均對(duì)Terminal Transferase活性具有抑制作用。 | |||||||||
功能測(cè)試(該實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)自實(shí)驗(yàn)室,未經(jīng)允許,不得轉(zhuǎn)載) | |||||||||
1. TDT不同底物的加尾效率分析 | 2. 不同酶量和不同溫度下加尾長(zhǎng)度分析 | ||||||||
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