| 耐熱反轉(zhuǎn)錄酶(ThermoStable V Reverse Transcriptase)是在鼠源病毒反轉(zhuǎn)錄酶基礎(chǔ)上進(jìn)行定點(diǎn)突變改良而得。該酶去除了RNase H活性中，從而避免反轉(zhuǎn)錄過程中降解RNA。同時(shí)經(jīng)過突變文庫篩選，使得其熱穩(wěn)定性更強(qiáng)，可耐受65℃高溫反應(yīng)。相比于低溫條件下反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，采用高溫反轉(zhuǎn)錄可顯著打開RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)，從而提高復(fù)雜RNA模板的擴(kuò)增性能、提高反轉(zhuǎn)錄cDNA的長度和產(chǎn)量，從而提高后續(xù)檢測(cè)的靈敏度。 | ||||||
組分 | ||||||
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單位定義 | ||||||
| 以poly(rA)為模板、oligo(dT)為引物，在37°C條件下，10分鐘內(nèi)催化1 nmol的dTTP摻入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定義為一個(gè)活性單位。 | ||||||
儲(chǔ)存 | ||||||
| -20°C可保存2年。 | ||||||
反應(yīng)實(shí)例 | ||||||
| 以人RNA為模板，應(yīng)用耐熱反轉(zhuǎn)錄酶和M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶分別在50°C、55°C、60°C和65°C進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為15min，然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增獲得542bp的片段。 | ||||||
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