| 由于miRNA(microRNA)分子序列較小，僅20nt左右，沒有真核生物特有的Poly(A)尾巴結(jié)構(gòu)，采用傳統(tǒng)Oligo dT引物和隨機(jī)引物很難獲得從miRNA到cDNA的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。目前普遍采用的解決方案有兩種：特異性反轉(zhuǎn)錄引物（圖1A所示）、兩步加A法反轉(zhuǎn)錄方案（圖1B所示）。 HaiGene公司開發(fā)出一套全新的一步法miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒，基于Peter改良的miR-Q技術(shù)，可以對(duì)成熟的miRNA同時(shí)完成Poly(A)反應(yīng)和反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，直接獲得含有特異性tag和15(T)的cDNA產(chǎn)物（如圖2所示）。該方法使得miRNA反轉(zhuǎn)錄與mRNA的反轉(zhuǎn)錄一樣輕松,直接將提取的microRNA與反應(yīng)緩沖液混合物混合并置于PCR儀上1小時(shí)即可獲得高濃度的、包含所有miRNA分子的cDNA產(chǎn)物,獲得的cDNA產(chǎn)物適合于采用SYBR Green染料法進(jìn)行RealTime PCR進(jìn)行定量檢測(cè)。 | ||||||||||
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組分 | ||||||||||
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| 注：如4XOne step miRNA RT Solution出現(xiàn)沉淀屬正�，F(xiàn)象，可用手捂化，混合均勻后使用不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 | ||||||||||
一步法microRNA反轉(zhuǎn)錄原理 | ||||||||||
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儲(chǔ)存 | ||||||||||
| 請(qǐng)置于-20°C，可保存2年；避免反復(fù)凍融。 | ||||||||||
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