| pUC57 Simple通用克隆載體采用了TOPO酶連接技術(shù)，載體預(yù)先偶聯(lián)上TOPO酶，當加入PCR擴增產(chǎn)物后，5 min就可以完成連接反應(yīng)，連接陽性率高。pUC57 Simple通用克隆載體消除了大部分的常用酶切位點，便于后續(xù)亞克隆。該產(chǎn)品適用于Taq酶擴增的含“A”尾巴和高保真酶擴增的PCR產(chǎn)物的連接，載體含有氨芐青霉素抗性篩選標記。 | ||||||||||||||||||
優(yōu)勢 | ||||||||||||||||||
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組分 | ||||||||||||||||||
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儲存 | ||||||||||||||||||
| RTS DH5α凍干感受態(tài)在未溶解狀態(tài)下，可于-20℃長期保存（>2年），已經(jīng)溶解后，請-60℃以下保存（3個月）。 | ||||||||||||||||||
圖譜 | ||||||||||||||||||
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測序引物 | ||||||||||||||||||
| 正向測序引物：M13F(-47): 5’- CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3’； 反向測序引物：M13R(-48): 5’- AGCGGATAACAATTTCACACAGGA-3’； | ||||||||||||||||||
實例 | ||||||||||||||||||
| 1.應(yīng)用pUC57 Simple TA平端通用克隆載體分別連接長度為2008bp的平端產(chǎn)物和A尾產(chǎn)物，挑20個菌進行菌檢，陽性率分別為95%和85%。 | ||||||||||||||||||
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| 2.不同的載體與片段的摩爾比對連接效率的影響 片段長2432bp，使用載體與片段摩爾比分別為1:1；1:2；1:3；1:4；1:5；1:6；1:7；1:8；1:9；1：10 室溫連接5min后轉(zhuǎn)入RTS-DH5α凍干感受態(tài)，通用引物菌檢陽性片段長度為菌檢陽性片段大小為2572bp。結(jié)果表明載體與片段摩爾比1:1；1:2；1:3；1:4；1:6；1:9時均有較高的陽性率，而1:5；1:7；1:8；1：10則陽性率稍低，說明連接反應(yīng)時應(yīng)選擇正確的載體與連接片段摩爾比，推薦最佳摩爾比為1:3。 | ||||||||||||||||||
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| 3.不同連接時間對連接效率的影響 平端產(chǎn)物片段長2432bp，載體與片段摩爾比分別為1:3，分別室溫連接5min、10min、15min、20min、25min、30min后轉(zhuǎn)入RTS-DH5α凍干感受態(tài)，通用引物菌檢陽性片段長度為菌檢陽性片段大小為2572bp。結(jié)果表明不同的連接時間對于菌斑數(shù)和陽性率的影響較小，無明顯差別，建議當連接片段<2500bp時，可選擇室溫連接5min。 | ||||||||||||||||||
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| 4.不同長度的平端產(chǎn)物片段對連接效率的影響 平端產(chǎn)物片段長度分別為500bp、1kb、2kb和5kb，載體與片段摩爾比分別為1:3，前三個片段室溫連接5min，5kb片段室溫連接30min，轉(zhuǎn)入RTS-DH5α凍干感受態(tài)，通用引物菌檢。結(jié)果表明長片段連接后菌斑數(shù)較短片段減少，但陽性率無明顯差別。 | ||||||||||||||||||
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| 5.不同長度的A尾產(chǎn)物片段對連接效率的影響 A尾產(chǎn)物片段長度分別為500bp、1kb、2kb、2.5kb和5kb，載體與片段摩爾比分別為1:3，前四個片段室溫連接5min，5kb片段室溫連接30min，轉(zhuǎn)入RTS-DH5α凍干感受態(tài)，通用引物菌檢。結(jié)果表明片段長度在500bp~2.5kb之間時陽性率無明顯差別，當片段長度≥5kb時陽性率有所降低，此時應(yīng)適當增加菌檢數(shù)量。 | ||||||||||||||||||
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