| T4 RNA 連接酶1催化3’→5’磷酸二酯鍵的形成，使核苷酸的5’-磷酸末端和3’-羥基末端連接，伴隨著ATP水解為AMP和PPi。T4 RNA 連接酶1的作用底物包括單鏈RNA、DNA及二核苷焦磷酸，它可催化ssDNA和RNA的連接，相對于ssDNA，該酶對RNA分子的連接和環(huán)化效率更高。 |  | ||||||||||
組分 | |||||||||||
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應用 | |||||||||||
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活性定義 | |||||||||||
| 1單位指在1×T4 RNA Ligase Buffer 中，37℃條件下，30分鐘內(nèi)將1nmol的5’-[32P]rA16轉(zhuǎn)化為磷酸鹽不溶物質(zhì)所需要的酶量。 | |||||||||||
儲存 | |||||||||||
| -20℃可保存3年。 | |||||||||||
使用注意事項 | |||||||||||
| 1.1× T4 RNA Ligase Buffer：50mM Tris-HCl pH 7.5，10mM MgCl2，1mM DTT。該酶反應時需要加入終濃度1mM ATP。 2. 最佳反應溫度37℃，65℃ 10min可使該酶失活。 3. 該酶的連接底物無論是ssDNA還是ssRNA均需要5’-磷酸化或預腺苷化。 4. 該酶不能連接雙鏈DNA或RNA。 5. 加入終濃度5~10% PEG 8000或增加孵育時間可提高連接效率。 | |||||||||||
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