| 9N 2.0 DNA連接酶（又名9oN DNA Ligase）能夠催化磷酸二酯鍵的形成，使與同一互補(bǔ)靶 DNA 鏈雜交的兩條相鄰寡核苷酸鏈的5´-磷酸末端和3´-羥基末端通過(guò)磷酸二酯鍵相連。該酶來(lái)源于極度耐熱的海底超嗜熱古菌（Thermococcus sp.）9°N 菌株中克隆的連接酶基因，在 45℃-90℃ 范圍內(nèi)均有活性。該酶進(jìn)一步經(jīng)基因工程基因突變，使得耐受更高的溫度，在90℃孵育15min仍然保留50%以上的活性，因此其適用于：（1）高溫條件下，連接DNA鏈上的切刻位點(diǎn)；（2）與 PCR 反應(yīng)條件兼容可用連接酶檢測(cè)反應(yīng)；（2）連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，對(duì)等位基因進(jìn)行特異性檢測(cè)。 | ||||||
組分 | ||||||
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應(yīng)用 | ||||||
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活性定義 | ||||||
| 1 單位指 50μl 反應(yīng)體系中，45℃ 條件下，15 分鐘內(nèi)能使 50% 的1μg 經(jīng) BstEII 消化的 λDNA 片段（12 bp 粘性末端）發(fā)生連接所需要的酶量。 | ||||||
儲(chǔ)存 | ||||||
| -20℃可保存兩年，長(zhǎng)期儲(chǔ)存請(qǐng)置于-70℃。 | ||||||
1× 9N DNA Ligase 反應(yīng)緩沖液 | ||||||
| 10 mM Tris-HCl，600μM ATP，2.5 mM MgCl2，2.5 mM DTT，0.1% Triton X-100（pH 7.5 @ 25℃），45℃ 溫育。 |
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