| PBCV DNA 連接酶也稱為SplintR 連接酶或 Chorella 病毒 DNA 連接酶，它能夠高效催化相鄰的 DNA 核苷酸的連接，這個連接過程需要一條互補(bǔ)的 RNA 在兩條 DNA 單鏈間起“夾板”或“橋梁”的固定作用。PBCV DNA連接酶的這種活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于傳統(tǒng)的T4 DNA連接酶，有助于miRNAs和mRNAs，包括SNPs在內(nèi)的研究方法的創(chuàng)新。另外，在二代測序和分子診斷等眾多領(lǐng)域中，PBCV DNA連接酶是富集目的基因的理想選擇。它具有穩(wěn)定的生物活性，對 RNA 介導(dǎo)固定的 DNA 底物親和性強(qiáng)（米氏常數(shù) Km = 1 nM），能夠在復(fù)雜的混合物中檢測到亞納摩爾級的特定 RNA。因此，在 RNA 檢測技術(shù)中，PBCV DNA 連接酶不失為最佳選擇用酶。 |  | ||||||
組分 | |||||||
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應(yīng)用 | |||||||
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活性定義 | |||||||
| 1 單位指 20 μl 反應(yīng)體系中，1×PBCV 連接酶反應(yīng)緩沖液，16℃ 條件下，15 分鐘內(nèi)能使 2 pmol 的DNA:RNA 雜交底物連接反應(yīng)完成50%所需的酶量。 | |||||||
反應(yīng)溫度及失活 | |||||||
| 該酶的最佳反應(yīng)溫度為25度，可在16-37度之間優(yōu)化，37度可明顯提高反應(yīng)的特異性；該酶在65°C 加熱20min即可失活。 | |||||||
儲存 | |||||||
| -20℃可保存3年。 | |||||||
使用注意事項 | |||||||
| 1. 1×PBCV Ligation Buffer：50mM Tris-HCl pH 7.5，5mM MgCl2，0.1mM ATP, 10mM DTT。 2. 該酶對ATP的要求比較寬泛，10-100uM ATP范圍內(nèi)都可發(fā)揮活性，5mM Mg2+可顯著增加連接產(chǎn)物的量，最佳ph為7.5-8.0。 3. 該酶對一價陽離子非常敏感，如Nacl或KCl的濃度應(yīng)低于50mM，100mM的Nacl會完全抑制連接反應(yīng)。 4. 該酶的反應(yīng)溫度為16~37℃，隨著溫度的上升酶活性會提高，但此時腺苷化產(chǎn)物也隨之增加，最佳溫度為25 ℃。 5. 連接效率隨著夾板RNA長度的減少而降低，當(dāng)長度小于等于10nt時，連接效率為零。 6. 供體的5’端第一個堿基為“A/T”時連接效率最高。 7. 受體的3’端第一個堿基為“T”時連接效率最高，3’端第一個堿基為“G”時連接效率最差。 | |||||||
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