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凍干LAMP-HNB變色擴增試劑盒

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LAMP是一種新型核酸擴增技術,采用4或6條能夠識別目的基因上的6個特異區(qū)域的引物,依賴于Bst DNA聚合酶的強鏈置換活性,在30~60分鐘內(nèi)DNA擴增可達109~1010倍。 LAMP檢測方法分為多種,包括染料法、濁度法、電泳法以及我司最新開發(fā)的TaqMan熒光探針法。我司推出基于LAMP常用檢測方法的凍干LAMP檢測通用試劑盒,該系列產(chǎn)品為凍干制品,相對于市面上的液體型產(chǎn)品更加穩(wěn)定,靈敏度更高,操作更加方便,通常在30min內(nèi)完成檢測。
LAMP變色擴增試劑盒包括:凍干LAMP-HNB變色擴增試劑盒、凍干LAMP橙綠變色擴增試劑盒、凍干LAMP濁度擴增試劑盒和凍干LAMP-TaqMan擴增試劑盒。其中 羥基萘酚藍(HNB)是一種金屬離子指示劑,HNB與鎂離子結(jié)合使得反應體系初始顏色為紫羅蘭色,隨著反應的進行,Mg2+與析出的焦磷酸根離子反應生成焦磷酸鎂沉淀,羥基萘酚藍失去了鎂離子使得體系顏色變?yōu)樘焖{色,而未反應的體系則仍保持著紫羅蘭色 ;而橙綠變色染料(OG Dye)則可與LAMP擴增產(chǎn)物結(jié)合成明顯的肉眼可見的熒光綠色,陰性反應則為橙色;濁度法則是由濁度儀檢測或肉眼觀察LAMP劇烈反應產(chǎn)生的焦磷酸鎂沉淀而判斷反應結(jié)果;而LAMP-TaqMan則是由熒光檢測儀器實時分析反應而判讀結(jié)果。

LAMP方法比較

? LAMP TaqMan LAMP-橙綠變色 LAMP-HNB LAMP-濁度
變色現(xiàn)象 熒光探針切割 橙色變綠色 紫羅蘭色變天藍色 無色變白色渾濁
檢測設備 定量PCR儀或恒溫熒光檢測儀 肉眼可見 肉眼可見 肉眼可見或濁度儀
區(qū)分度 極易判讀 極易判讀 可以判讀 相對不明顯
靈敏度 單Copy 10Copy 10-50Copy 10-100拷貝
特異性 高特異 比較特異 一般 一般
反應溫度 60~63℃ 60~65℃ 60~65℃ 60~65℃
反應時間 15~25min 20~40min 20~40min 20~40min
反應用酶 Bst5.0 Bst4.0 Bst4.0 Bst4.0
綜合推薦 ★★★★★ ★★★★★ ★★★ ★★
試劑開發(fā)難度 較易 較難 非常難 較難
LAMP擴增試劑盒

儲存

所有制品為凍干形式,在未溶解前,該制品可-20℃長期保存,并可室溫運輸,性能無下降。使用LAMP Buffer溶解后,可立即使用,剩余試劑可在-20℃保存1個月,在-60℃以下長期保存。

實例

以檢測非洲豬瘟病毒(ASFV)為例,以標準質(zhì)粒為模板,分別用橙綠變色、HNB顯色和濁度方法檢測,結(jié)果如下圖。

LAMP擴增試劑盒

LA

注意事項

(1). 為了減少交叉污染,請分區(qū)操作(試劑和模板DNA的配置操作最好在不同區(qū)域中進行)。
(2). 實驗時,所需模板量取決與樣品類型(0.1 ng~100 ng),可先進行預實驗確定模板量。
(3). 各區(qū)物品均為專用,不可交叉使用,防止污染。
(4). 實驗過程中應穿工作服,帶手套,建議使用帶濾芯的一次性吸嘴。
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