LAMP是一種新型核酸擴(kuò)增技術(shù),采用4或6條能夠識別目的基因上的6個(gè)特異區(qū)域的引物,依賴于Bst DNA聚合酶的強(qiáng)鏈置換活性,在30~60分鐘內(nèi)DNA擴(kuò)增可達(dá)109~1010倍。 LAMP檢測方法分為多種,包括染料法、濁度法、電泳法以及我司最新開發(fā)的TaqMan熒光探針法。我司推出基于LAMP常用檢測方法的凍干LAMP檢測通用試劑盒,該系列產(chǎn)品為凍干制品,相對于市面上的液體型產(chǎn)品更加穩(wěn)定,靈敏度更高,操作更加方便,通常在30min內(nèi)完成檢測。 LAMP變色擴(kuò)增試劑盒包括:凍干LAMP-HNB變色擴(kuò)增試劑盒、凍干LAMP橙綠變色擴(kuò)增試劑盒、凍干LAMP濁度擴(kuò)增試劑盒和凍干LAMP-TaqMan擴(kuò)增試劑盒。其中 羥基萘酚藍(lán)(HNB)是一種金屬離子指示劑,HNB與鎂離子結(jié)合使得反應(yīng)體系初始顏色為紫羅蘭色,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,Mg2+與析出的焦磷酸根離子反應(yīng)生成焦磷酸鎂沉淀,羥基萘酚藍(lán)失去了鎂離子使得體系顏色變?yōu)樘焖{(lán)色,而未反應(yīng)的體系則仍保持著紫羅蘭色 ;而橙綠變色染料(OG Dye)則可與LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)合成明顯的肉眼可見的熒光綠色,陰性反應(yīng)則為橙色;濁度法則是由濁度儀檢測或肉眼觀察LAMP劇烈反應(yīng)產(chǎn)生的焦磷酸鎂沉淀而判斷反應(yīng)結(jié)果;而LAMP-TaqMan則是由熒光檢測儀器實(shí)時(shí)分析反應(yīng)而判讀結(jié)果。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
LAMP方法比較 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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儲(chǔ)存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
所有制品為凍干形式,在未溶解前,該制品可-20℃長期保存,并可室溫運(yùn)輸,性能無下降。使用LAMP Buffer溶解后,可立即使用,剩余試劑可在-20℃保存1個(gè)月,在-60℃以下長期保存。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
實(shí)例 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
以檢測非洲豬瘟病毒(ASFV)為例,以標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒為模板,分別用橙綠變色、HNB顯色和濁度方法檢測,結(jié)果如下圖。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
LAMP引物設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)指南 **本公司免費(fèi)為客戶設(shè)計(jì)LAMP引物,需要設(shè)計(jì)引物者請來信咨詢 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
注意事項(xiàng) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(1). 為了減少交叉污染,請分區(qū)操作(試劑和模板DNA的配置操作最好在不同區(qū)域中進(jìn)行)。 (2). 實(shí)驗(yàn)時(shí),所需模板量取決與樣品類型(0.1 ng~100 ng),可先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)確定模板量。 (3). 各區(qū)物品均為專用,不可交叉使用,防止污染。 (4). 實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)穿工作服,帶手套,建議使用帶濾芯的一次性吸嘴。 |
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