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熱敏型雙鏈DNA特異性核酸酶(dsDnase)

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熱敏雙鏈DNA特異性核酸酶(Heat labile ds-DNA-specific Nuclease,又名ezDNase或HL dsDNase),為雙鏈特異性核酸酶。其特異性的識(shí)別降解雙鏈DNA,對(duì)單鏈DNA或RNA幾乎無(wú)活性,其降解dsDNA的能力比ssDNA高~5000倍。除此外,該雙鏈DNA特異性核酸酶降解雙鏈DNA的能力比bovine DNaseI高~30倍,因此特別適用于去除RNA樣品中的基因組DNA污染。該熱敏型雙鏈DNA核酸酶可將DNA降解為2~8bp的產(chǎn)物,且55℃ 5min可使該酶不可逆失活,同時(shí)又能保持RNA和ssDNA的穩(wěn)定性,因此產(chǎn)物無(wú)需再純化,可直接用于后續(xù)反應(yīng)。同時(shí)該酶與M-MLV和AMV的反應(yīng)Buffer都是兼容的,可應(yīng)用于反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中去除樣本中基因組DNA的污染,提高反轉(zhuǎn)錄效率。

單位定義

1單位指在25℃標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件下,每分鐘OD260增加0.001(約每分鐘消化1pmol核酸底物)所需的酶量。

組分

名稱(chēng) 數(shù)量
HL dsDNase (2 U/μl) 50 μl/500 μl
10×dsDNase Buffer 1 ml /2 ml

儲(chǔ)存

置于-20°C,可保存3年。

使用注意事項(xiàng)

((1)1×dsDNase Buffer:20mM Tris-HCl pH8, 2mM MgCl2。該酶需要1~3mM MgCl2。
(2)該酶對(duì)DTT敏感,任何反應(yīng)體系中不得包含DTT。
(3)通常在RT反應(yīng)中的用量為0.1~0.5U/20 μl體系。
(4)任何濃度的SDS、鹽酸胍、β-mercaptoethanol或高鹽離子(>300mM)均抑制該酶活性。
(5)該酶的最佳反應(yīng)溫度為25~37℃,42℃ 30min后活性損失70%。

實(shí)例

取人基因組2.5 μg,分別用0、0.125、0.25、0.5、1 μl的熱敏雙鏈DNA特異性核酸酶37℃消化15min,如圖所示。
 
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