Rnase Free DNase I是將單鏈或雙鏈 DNA 同等程度的隨機(jī)分解,生成具有 5′-P 末端寡核苷酸的脫氧核糖核酸內(nèi)切酶。由于RNase-free DNase I中Protease已幾乎被完全去除,從而提高了該酶在 pH 中性區(qū)域的穩(wěn)定性。此外Rnase Free DNase I中添加了Rnase Inhibitor,用于抑制RNA樣品中殘留的RNase核酸酶,因此可以有效抑制RNA提取過(guò)程中Rnase酶對(duì)RNA的降解。Stop Buffer終止反應(yīng)后,可通過(guò)一步加熱失活DNase I活性。 | |||||||||
單位定義 | |||||||||
在50 μl體系下,37℃ 10min條件下完全消化1 μg pBR322質(zhì)粒DNA所需的酶量定義為1個(gè)活性單位。 | |||||||||
組分 | |||||||||
*Rnase Free DNase I (2 U/μl)中含有20U/μl的Rnase Inhibitor,故進(jìn)行消化試驗(yàn)時(shí)不需要再額外添加Rnase Inhibitor。 | |||||||||
純度 | |||||||||
2U的本酶和1μg的16S, 23S rRNA在37℃、pH7.5的條件下反應(yīng)1小時(shí),RNA的電泳譜帶不發(fā)生變化 | |||||||||
儲(chǔ)存 | |||||||||
置于-20°C,可保存2年。 | |||||||||
使用注意事項(xiàng) | |||||||||
1)通常加熱方法即可失活DNase I。如需要去除殘留的變性蛋白,可在37°C消化完畢后使用酚氯仿抽提并沉淀RNA樣品(不進(jìn)行加熱操作)。 2)10× RD Stop Buffer中含有螯合劑用于去除二價(jià)陽(yáng)離子,進(jìn)行加熱失活前,必須加入2 μl 10× RD Stop Buffer并混合均勻,再進(jìn)行熱失活,否則會(huì)導(dǎo)致RNA降解。 3)處理完畢的RNA樣品進(jìn)行一步反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時(shí),添加量需要<20%(如20μl的反轉(zhuǎn)錄體系中加入量要<4μl) | |||||||||
功能測(cè)試 | |||||||||
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