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核酸內(nèi)切酶IV

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核酸內(nèi)切酶IV又叫Nfo,來源于E.coli,參與DNA損傷修復(fù)。該酶可識(shí)別雙鏈DNA分子上的脫嘌呤/脫嘧啶(AP)位點(diǎn),并切割 AP 位點(diǎn) 5´ 端的第一個(gè)磷酸二酯鍵,產(chǎn)生3´羥基和5´脫氧核糖磷酸末端;另外,核酸內(nèi)切酶IV還具有3´二酯酶活性,能從 DNA 的 3´末端釋放磷酸甘油醛、完整的脫氧核糖 5´-磷酸和磷酸該酶還具有3´-5´的外切酶活性,該酶對(duì)底物的漸進(jìn)式作用受到金屬離子、DTT、EDTA等的影響,且更傾向于作用于3´凹末端的雙鏈DNA。

組分

名稱 數(shù)量
Endonuclease IV (10 U/μl) 100 μl/500 μl
10X Endonuclease IV Buffer 1 ml/1 ml×5

應(yīng)用

  • 單細(xì)胞凝膠電泳
  • DNA損傷和修復(fù)研究
  • SNP分析

單位定義

在1×Endonuclease IV Buffer (100 mM NaCl,50 mM Tris-HCl(pH 7.9),10 mM MgCl2,1 mM DTT)中,10μl反應(yīng)體系內(nèi), 37°C反應(yīng)1h,能切割 1 pmol 含一個(gè) AP 位點(diǎn)的 34 mer 寡核苷酸雙鏈所需要的酶量定義為一個(gè)活性單位。

酶儲(chǔ)存液

50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 50% Glycerol.

熱失活

85°C 20min。

儲(chǔ)存

置于-20°C可保存2年,避免反復(fù)凍融。
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