| Benzonase核酸酶，是一種核酸內(nèi)切酶，可將核酸降解成2~5個(gè)堿基的5‘單磷酸核苷酸，因其能高效降解任何形式（雙鏈，單鏈，線狀，環(huán)狀）的DNA和RNA而沒(méi)有蛋白裂解活性，又被稱為“全能核酸酶”。Benzonase核酸酶能有效降低蛋白樣品粘度，去除蛋白樣品中核酸的污染，且無(wú)蛋白酶活性殘留，核酸酶活性達(dá)1×106 U/mg蛋白。Benzonase核酸酶在降低粘性的同時(shí)， 也具有多種其他用途，如：減少了樣品處理時(shí)間，增加了蛋白產(chǎn)量，離心時(shí)時(shí)沉淀和上清分離的更徹底，更便于溶液的離心（尤其是超濾）；提高色譜純化的效率等。 本公司Benzonase核酸酶包括四種，分別為不含任何標(biāo)簽的Benzonase核酸酶（科研級(jí)別）、無(wú)內(nèi)毒素Benzonase核酸酶、Strep tagII Benzonase核酸酶（科研級(jí)別）和無(wú)內(nèi)毒素的Strep tagII Benzonase核酸酶，可適應(yīng)不同下游用途的需求。其中Strep tagII Benzonase核酸酶可在消化完核酸后通過(guò)Strep Tactin XT Resin高效去除，而無(wú)內(nèi)毒素的兩種Benzonase核酸酶，內(nèi)毒素含量<40EU/mL（按照單位換算量計(jì)算為，每1000U中含有的內(nèi)毒素<0.15EU），可適用于藥用級(jí)別的研發(fā)和生產(chǎn)。另外，核酸酶殘留可通過(guò)我公司開(kāi)發(fā)的基于 熒光探針的Benzonase核酸酶殘留檢測(cè)試劑盒進(jìn)行評(píng)測(cè)，15min即可完成檢測(cè)，最低可檢測(cè)到2ng/ml的核酸酶殘留。
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用量推薦 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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單位定義 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 37℃，pH 8.0反應(yīng)條件下，在30分鐘內(nèi)使△A260 值降低1.0(相當(dāng)于完全消化37 μg DNA )的酶量定義為一個(gè)活性單位。 注意：含大量蛋白、細(xì)胞壁、其它鹽分的粗制品，對(duì)該酶活性有部分抑制作用，使用時(shí)需要增加酶的用量。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
應(yīng)用 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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儲(chǔ)存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 置于-20°C，可保存2年。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
實(shí)例分析 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| Fig1. 分別取不同量（0、0.125、0.25、0.5、1、5、10U）的Benzonase核酸酶消化人基因組DNA10min，進(jìn)行瓊脂糖電泳。 | Fig2. A為未加Benzonase處理的，B為加Benzonase處理的 樣品進(jìn)行二維電泳。如圖所示，Benzonase處理的樣品可顯 著增加二維電泳的分辨率。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| Fig3.經(jīng)RIPA裂解未經(jīng)Benzonase核酸酶處理的樣品， 大量基因組DNA釋放出來(lái)，呈鼻涕狀。 | Fig4.離心后，左管為未加Bezonase核酸酶，有鼻涕狀 粘稠物質(zhì)懸浮在管中，右管為加Bezonase核酸酶，上 清為透明液體。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
超強(qiáng)兼容性 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 全能核酸酶在非常廣泛的條件下，都能保持很高的穩(wěn)定性和消化核酸的活性，這使其能夠與多種細(xì)胞裂解液，如RIPA，或含有多種離子和非離子型去污劑、還原劑的蛋白提取試劑等兼容。例如：>100mM的鹽酸胍會(huì)完全抑制Benzonase活性，1mM的EDTA會(huì)部分抑制Benzonase活性，5mM的EDTA會(huì)使活性喪失90%，1mM的PMSF則不會(huì)抑制核酸酶活性。 濃度<0.4%的Triton® X-100對(duì)核酸酶活性幾乎無(wú)影響，<0.4%的脫氧膽酸鈉使核酸酶可保持70%的活性，超過(guò)該臨界值之后核酸酶活性會(huì)急劇降低，1%的濃度會(huì)使活性喪失70%；0.05%的SDS對(duì)核酸酶活性幾乎無(wú)影響，而SDS濃度在0.1%-1%之間時(shí)，核酸酶在變性后活性會(huì)急劇降低，可通過(guò)增加核酸酶的量使活性得到補(bǔ)償。另外，核酸酶可耐受6M尿素，當(dāng)尿素達(dá)到7M時(shí)，核酸酶在變性后活性會(huì)急劇降低，亦可通過(guò)增加核酸酶的量使活性得到補(bǔ)償。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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Benzonase的去除 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 對(duì)于Strep-tag II標(biāo)簽的Benzonase核酸酶（C2003，C2004）可通過(guò)Strep Tactin XT Resin（HaiGene，C0402）直接 去除，去除率>95%；對(duì)于不帶標(biāo)簽的Benzonase核酸酶（C2001，C2002），可通過(guò)色譜純化去除核酸酶，然后可通過(guò)檢測(cè)殘留活性（HaiGene, C2005）或ELISA檢測(cè)來(lái)判斷去除是否成功。常見(jiàn)的色譜純化方式有陽(yáng)離子交換介質(zhì)和陰離子交換介質(zhì)，具體的Benzonase去除條件如下表： | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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