巰基檢測(cè)試劑盒是利用經(jīng)典的Ellman法進(jìn)行總巰基檢測(cè)的試劑盒。試劑盒準(zhǔn)確性高，重復(fù)性和抗干擾性強(qiáng)，使用方便，可用于測(cè)各種動(dòng)物的血清/血漿、組織、細(xì)胞、培養(yǎng)液以及植物組織樣本等。 Ellman試劑是一種通用的水溶性化合物，用于定量溶液中的游離巰基。該化合物的溶液在與巰基反應(yīng)時(shí)會(huì)產(chǎn)生可測(cè)量的黃色產(chǎn)物。因此，Ellman試劑非常適合用作巰基測(cè)定試劑，因?yàn)樗诜磻?yīng)緩沖液中對(duì)-SH基團(tuán)具有特異性，摩爾消光系數(shù)高且反應(yīng)時(shí)間短。 本試劑盒用于各種樣品中的游離巰基，如果需要還原所有二硫鍵，測(cè)定總半胱氨酸巰基，。 生物體內(nèi)活性巰基（SH）主要包括谷胱甘肽巰基和蛋白質(zhì)巰基。谷胱甘肽巰基能夠修復(fù)氧化損傷的蛋白質(zhì)，參與活性氧清除。蛋白質(zhì)巰基主要存在于半胱氨酸，是蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和生物體內(nèi)某些氧化還原反應(yīng)重要基團(tuán)，在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中兩個(gè)巰基脫氫而形成的二硫鍵，使相鄰多肽得以連接．對(duì)于維持蛋白質(zhì)完整結(jié)構(gòu)作用十分重要。 巰基還是很多酶的活性基團(tuán)，一些重金屬鹽如Hg2+等與酶巰基結(jié)合，影響酶活性。巰基化合物與機(jī)體許多機(jī)能活動(dòng)，藥物及毒物的作用以及某些疾病的發(fā)生發(fā)展有著密切關(guān)系。 所有動(dòng)物組織都含有不同量的活性巰基，測(cè)定組織和血液中巰基含量已日益為人們所重視,以期探索對(duì)某些疾病的發(fā)生機(jī)理、治療、預(yù)防以及預(yù)后判斷等方面的研究意義。 可以提供細(xì)胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、細(xì)胞代謝、氧化應(yīng)激、細(xì)胞膜流動(dòng)性、膜通透性轉(zhuǎn)換孔、細(xì)胞耗氧率、細(xì)胞內(nèi)pH、細(xì)胞粘附、細(xì)胞自噬等數(shù)百種檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品。 可以為您提供各種顏色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、溶酶體、線(xiàn)粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、骨架、微管等細(xì)胞、細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)熒光染色試劑盒產(chǎn)品，以及鈣離子、鈉離子、氬離子等各種熒光染色試劑盒產(chǎn)品。 可以提供動(dòng)物、植物、微生物、酵母、水產(chǎn)、家禽、獸類(lèi)、土壤等樣本的各種生化指標(biāo)檢測(cè)的數(shù)百種試劑盒產(chǎn)品。
2.恒溫水浴鍋
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.純水
2.試管
3.吸頭
4.一次性手套
2.測(cè)定復(fù)雜蛋白質(zhì)樣品時(shí)，如果需要將內(nèi)部巰基完全暴露，可以用鹽酸胍變性劑處理需要測(cè)定的蛋白質(zhì)樣品，有助于將內(nèi)部巰基完全暴露。不推薦將尿素用作變性劑，因?yàn)樗鼤?huì)形成與巰基發(fā)生反應(yīng)的氰酸鹽。
3.如果需要還原待測(cè)蛋白質(zhì)樣品的二硫鍵，測(cè)定所有的二硫鍵巰基，可以使用DTT或β-巰基乙醇 （BME，2-ME）還原劑處理待測(cè)蛋白樣品，但是注意一定要完全去除還原劑DTT和β-巰基乙醇，因?yàn)樗鼈儠?huì)引入巰基�？梢圆捎猛肝龌蛎擕}的方法去除還原劑DTT和β-巰基乙醇。
注意避免還原分子的樣品損失，盡可能完全回收還原蛋白質(zhì)/肽。
在還原過(guò)程中，向樣品緩沖液中加入 5-20 mM EDTA 有助于防止二價(jià)金屬（如 Zn2+、Cu2+ 和 Mg2+）對(duì)巰基進(jìn)行再氧化。
4.還原樣品應(yīng)在還原后立即進(jìn)行測(cè)定，因?yàn)槎蚧飼?huì)隨時(shí)間重新形成。
使用前，準(zhǔn)確吸取10 ml試劑B1加入試劑B2干粉，充分溶解混勻，即成ELLMAN試劑B工作液，4℃避光保存。
2. 樣本處理
血清/培養(yǎng)液等液體樣本：直接檢測(cè)或稀釋后檢測(cè)。
蛋白質(zhì)粉末：用水溶解后檢測(cè)。
動(dòng)物、植物細(xì)胞組織：按照組織質(zhì)量（g）：生理鹽水或PBS體積(mL)為1：5-10 的比例（建議稱(chēng)取約100 mg 組織，加入1 mL 生理鹽水或PBS等緩沖液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后8000×g，4℃離心15 min，取上清，置冰上待測(cè)。
3. 總巰基的測(cè)定
按下表在試管中加入試劑。
同時(shí)做空白管（無(wú)樣品液）、樣品對(duì)照管（無(wú)ELLMAN試劑）。
充分混勻，置室溫靜置15分鐘。
在412 nm，0.5 cm光徑，以反應(yīng)緩沖液試劑A調(diào)零。
測(cè)定各管OD值：A測(cè)定、A空白、A對(duì)照。
【注】：
如果OD值太大，可以將樣品用試劑A稀釋后再檢測(cè)。
空白管做一個(gè)即可。
對(duì)照管最好每個(gè)樣品均做，如果樣品本身的背景值較低，也可以只做一個(gè)。
4. 計(jì)算
血清中總巰基含量（mmol/L）
=（A測(cè)定 - A空白 - A對(duì)照）÷14.15÷0.5×10
【注】：
以上以0.5 cm光徑檢測(cè)設(shè)備為例，如果實(shí)際使用的檢測(cè)設(shè)備是采用1 cm光徑，將計(jì)算公式中的0.5換成1即可。
如果樣品進(jìn)行了稀釋?zhuān)?jì)算時(shí)注意乘上相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
組織細(xì)胞中總巰基含量（mmol/g）
=（A測(cè)定 - A空白 - A對(duì)照）÷14.15÷0.5×10÷蛋白含量（g/L）
【注】：
以上以0.5 cm光徑檢測(cè)設(shè)備為例，如果實(shí)際使用的檢測(cè)設(shè)備是采用1cm光徑，將計(jì)算公式中的0.5換成1即可。
【注】：
14.15為毫摩爾消光系數(shù)14.15 / mM •cm；14.15 mM-1•cm-1
0.5為光徑0.5 cm；
10為反應(yīng)總體積/樣品取樣量
