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HPV假病毒HPV33-RFP

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【預期用途】
用于HPV抗血清或者單抗中和抗體滴度體外檢測。
【檢驗原理】
中和抗體在體外與假病毒中和,使得假病毒喪失感染細胞的能力,進入細胞的假病毒會表達EGFP等蛋白,通過Elispot讀板儀掃描并計數每孔熒光斑點數,通過與假病毒對照組熒光斑點數比較,計算其抑制百分比,通過計算公式可以計算出當假病毒50%被抑制時抗體的稀釋倍數,來計算其ID50,用ID50來表示抗體對假病毒中和活性大小。
【主要組成成分】
HPV假病毒顆粒,L1和L2蛋白以及報告基因,自折疊成HPV假病毒顆粒
【儲存條件及有效期】
-80℃ 密封貯存。有效期:長期。
避免反復凍融。
生產日期及有效期詳見標簽。
【樣本要求】
樣本為HPV假病毒,可在體內復制一輪,操作時需在無菌條件下操作。
【檢驗方法】
1 預先4-8小時鋪293FT細胞于96孔板,每孔細胞數為1.5×104 ,置于37℃、 5% CO2孵箱中培養(yǎng)。
2 加樣順序
2.1 40倍初始稀釋:取96孔U型板,于B4- B11孔中各加入152μl DMEM完全培養(yǎng)基,其余各孔中加入120μl DMEM完全培養(yǎng)基。于B4- B11孔中加入血清樣品8μl/孔,每樣品兩復孔。
2.2 10倍初始稀釋:取96孔U型板,于B4- B11孔中各加入128μl DMEM完全培養(yǎng)基,其余各孔中加入120μl DMEM完全培養(yǎng)基。于B4- B11孔中加入血清樣品32μl/孔,每樣品兩復孔。
3樣品稀釋:將多道電動移液器調至40μl移液和100μl混勻程序,對B4- B11孔中液體輕柔的反復吹吸8次充分混勻,然后轉移40μl液體至對應的C4- C11孔,輕柔的反復吹吸8次后轉移至D4-D11孔,以此類推,最后從G4-G11孔中吸棄40μl液體。
5.2.4 用DMEM完全培養(yǎng)基將假病毒稀釋至200TCID50,于第B3-G11孔,每孔加120μl。
5.2.5將稀釋板4℃ 放至1小時。
5.2.6 從稀釋板各孔中吸取100μl的假病毒血清混合物(或培養(yǎng)基)貼壁緩緩加入預先已鋪好細胞的培養(yǎng)板對應孔中,輕拍培養(yǎng)板四周混勻。  
5.2.7 將細胞培養(yǎng)板置于37℃、5% CO2的孵箱中培養(yǎng)60-96小時。 
5.2.8 ELISPOT讀板儀進行檢測,計算感染抑制率(%)=1-(樣本檢測值-細胞對照值)/(病毒對照值-細胞對照值)×100%。
5.2.9 計算ID50。 
【陽性判斷值】
中和實驗過程中需要設置陰性對照,陽性對照,作為參照,來判斷實驗是否成立,陰性對照ID50小于30,陽性ID50大于30作為判斷值
【產品性能指標】
1. 外觀
外觀應滿足如下要求:
1.1包裝完整,無破損;外觀應整潔,文字符號標識清晰;
【注意事項】
1.本產品僅供中和抗體體外檢測。
2.減少反復凍融
3.流水或者4℃融化使用。
4.無菌操作。
本產品不能重復使用
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