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脂多糖(LPS)提取試劑盒

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 產(chǎn)品概述 product description

脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁外膜的主要成分,結(jié)構(gòu)很復(fù)雜、熱穩(wěn)定性極高(在250℃下干熱滅菌2h才完全滅活)。受LPS發(fā)現(xiàn)的歷史原因,如今LPS的概念幾乎等同于內(nèi)毒素(endotoxin)。LPS由多糖鏈和脂質(zhì)A組成,不同細(xì)菌間的多糖鏈?zhǔn)歉叨茸兓,決定細(xì)菌的血清型;而脂質(zhì)A主要影響LPS的毒性作用。LPS可以引起免疫刺激的級(jí)聯(lián)反應(yīng)和機(jī)體的毒性病理生理活動(dòng),包括釋放內(nèi)毒素引起感染性休克從而導(dǎo)致末梢血管虛脫。臨床常通過(guò)檢測(cè)LPS的存在來(lái)診斷腦膜炎。 由于LPS與機(jī)體免疫機(jī)能的密切關(guān)系,生命科學(xué)研究常常提取LPS進(jìn)行相關(guān)的研究,如闡明LPS的結(jié)構(gòu),代謝,免疫學(xué),生理學(xué),毒性,生物合成途徑;誘導(dǎo)生長(zhǎng)促進(jìn)因子如白介素的合成與分泌;誘導(dǎo)疾病研究的動(dòng)物模型如炎癥反應(yīng),急性肺損傷。 PS提取試劑盒采用簡(jiǎn)單步驟即可快速提取細(xì)菌脂多糖,提取產(chǎn)量高,省時(shí),蛋白質(zhì)和核酸污染低。

保存溫度
2-8℃
注意事項(xiàng)
1.蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。
3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完!
有效期
一年
檢測(cè)方法
WB,IP等
適用樣本
細(xì)菌
產(chǎn)品特點(diǎn)
1.適用性廣,能從所有革蘭氏陰性菌中提取LPS。
2.操作簡(jiǎn)單方便。
3.提取LPS下游應(yīng)用廣,包括直接用于免疫刺激
產(chǎn)品應(yīng)用
WB,IP等
儀器準(zhǔn)備
1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
試劑準(zhǔn)備
1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
耗材準(zhǔn)備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項(xiàng)
使用注意事項(xiàng):
1.離心機(jī)轉(zhuǎn)速有相對(duì)離心力(RCF,×g)和每分鐘轉(zhuǎn)速(RPM)兩種表示方式,有些離心機(jī)設(shè)置有RPM和×g顯示切換,但部分離心機(jī)沒(méi)有自動(dòng)切換功能。需要用下面的公式進(jìn)行換算:
g=r×1.118×10-5×rpm2 (r 為有效離心半徑,即從離心機(jī)軸心到離心收集管底部中心位置的長(zhǎng)度,單位為厘米) 例如: 轉(zhuǎn)速為3000rpm,有效離心半徑為10 cm,則相對(duì)離心力(RCF,×g)為=10×1.118×10-5×30002=1006.2(×g)。
2.可以用試劑盒或者苯酚硫酸法進(jìn)行脂多糖定量。
 
使用方法

1. 室溫8000×g離心3分鐘收獲細(xì)菌細(xì)胞
2. 加入500 μl試劑A重懸細(xì)菌,8000×g離心3分鐘,棄上清。
3. 收集沉淀,加入500 μl試劑A重懸沉淀,8000×g離心3分鐘,棄上清。
4. 收集沉淀,加入500 μl提取液B重懸沉淀。
5. 在150-300w超聲10秒間隔10秒,超聲5-15分鐘。
6. 在10000×g離心10分鐘取上清。
7. 在上清中加入500 μl提取液C,劇烈渦旋20秒充分混勻。
8. 在66-68℃水浴或氣浴孵育30分鐘。中間隔10分鐘用移液器輕輕吹打混勻。
9. 置4℃靜置過(guò)夜。
10. 在4℃,3000×g離心20分鐘。
11. 取最上層上清至另一干凈離心管,即得脂多糖樣品。
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