維生素C 檢測(cè)試劑盒(磷鉬酸微板法)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
維生素 C(Vitamin C)又稱(chēng) L-抗壞血酸,是高等靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物與其他少數(shù)生物的必需營(yíng)養(yǎng)素,在生物體內(nèi)維生素 C 是一種抗氧化劑,為酸性己糖衍生物,是稀醇式己糖酸內(nèi)酯,保護(hù)身體免于自由基的威脅,同時(shí)也是一種輔酶,其廣泛的食物來(lái)源為各類(lèi)新鮮蔬果。Vc 有 L-型和 D-型兩種異構(gòu)體,只有 L-型的才具有生理功能,還原型和氧化型都有生理活性。
維生素 C 檢測(cè)試劑盒(磷鉬酸微板法)檢測(cè)原理是在強(qiáng)酸和偏磷酸根離子存在條件下,鉬酸銨能與還原型維生素 C 反應(yīng)生成藍(lán)色化合物,在一定濃度范圍吸光度值與濃度呈線性關(guān)系,以酶標(biāo)儀 760nm 處檢測(cè)吸光度,獲得 Vitamin C 含量。該試劑盒主要用于植物組織中的還原型維生素 C(抗壞血酸)的檢測(cè),其優(yōu)點(diǎn)是:1、反應(yīng)迅速;2、操作簡(jiǎn)便; 3、還原糖及其他常見(jiàn)的還原物質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)沒(méi)有干擾,專(zhuān)一性好。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成:
編號(hào) 名稱(chēng) | L2031 100T | Storage | |
試劑(A): Vitamin C 標(biāo)準(zhǔn)(250μg/ml) | 1ml | 4℃ 避光 | |
試劑(B): 組 織勻漿液 | 試劑(B1): 組織勻漿液 A | 100ml | RT |
試劑(B2): 組織勻漿液 B | 12ml | RT | |
試劑(C): MPA | 0.2g | RT | |
試劑(D): 酸性緩沖液Ⅰ | 5ml | RT | |
試劑(E): 酸性緩沖液Ⅱ | 10ml | RT | |
試劑(F): 鉬酸銨 | 0.5g | RT | |
使用說(shuō)明書(shū) | 1 份 |
自備材料:
1、蒸餾水
2、電子天平、研磨器或勻漿器
3、離心機(jī)、離心管或試管
4、水浴鍋或恒溫箱
5、酶標(biāo)儀、96 孔板
操作步驟(僅供參考):
1、配制組織勻漿液:按組織勻漿液 A:組織勻漿液 B:蒸餾水=8:1:91 的比例混勻即得。
2、準(zhǔn)備樣品:取待測(cè)材料如青菜、水果、松針等,清洗擦干,準(zhǔn)確稱(chēng)量 1g,加入研磨器內(nèi),再加入少量組織勻漿液,研磨碎,留取上清,再次用組織勻漿液研磨,最后一并倒入 10ml 離心管,補(bǔ)充組織勻漿液至 10ml,充分混勻,4000r/min 離心
5min,取 0.05ml上清液,加入等量蒸餾水,即為待測(cè)液。
3、配制 MPA 工作液:稱(chēng)取 0.3g MPA 粉末,充分溶解于 10ml 酸性緩沖液Ⅰ中,也可根據(jù)使用情況稱(chēng)取一定量的 MPA 按比例溶解即可,4℃保存 3~4 天有效。
4、配制 Vitamin C Assay buffer:取鉬酸銨粉末 0.5g,充分溶解于 10ml 蒸餾水中,也可根據(jù)使用情況稱(chēng)取一定量的鉬酸銨加水按比例溶解即可,4℃避光保存。注意:鉬酸銨溶于水會(huì)逐漸變化成乳白色濁液,則不能使用。
5、配制系列 Vitamin C 標(biāo)準(zhǔn):取干凈離心管或試管,按下表進(jìn)行操作,依次稀釋。
加入物(μl ) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
Vitamin C 標(biāo)準(zhǔn)(250μg/ml) | 20 | 30 | 40 | 50 | 60 | 80 | 100 |
蒸餾水 | 80 | 70 | 60 | 50 | 40 | 20 | 0 |
相當(dāng)于 Vitamin C 濃度(μg/ml) | 50 | 75 | 100 | 125 | 150 | 200 | 250 |
6、Vitamin C 加樣:按照下表設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、測(cè)定孔,溶液應(yīng)按照順序依次加入,并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的 Vitamin C 含量過(guò)高,可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定,樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置 2 平行孔,求平均值。
加入物(μl) | 空白孔 | 標(biāo)準(zhǔn)孔 | 測(cè)定孔 |
蒸餾水 | 40 | - | - |
系列 Vitamin C 標(biāo)準(zhǔn)(1~7 號(hào)) | - | 40 | - |
待測(cè)液 | - | - | 40 |
1×組織勻漿液 | 80 | 80 | 80 |
MPA 工作液 | 20 | 20 | 20 |
酸性緩沖液Ⅱ | 40 | 40 | 40 |
Vitamin C Assay buffer | 80 | 80 | 80 |
7、Vitamin C 測(cè)定:立即混勻,30℃水浴 20min,空白調(diào)零,以酶標(biāo)儀測(cè)定 760nm 處系列標(biāo)準(zhǔn)孔、測(cè)定孔的吸光度。
計(jì)算:以系列標(biāo)準(zhǔn) Vitamin C (50、75、100、125、150、200、250μg/ml)為橫坐標(biāo),以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,求得回歸方程,以測(cè)定孔的吸光度代入回歸方程求得樣品維生素 C 含量。
100g 樣品中維生素 C 含量(mg)
=(c0×V1)×100/(m1×1000)=(c0×V1) /(m1×10)
式中:c0 :待測(cè)樣品的吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出的維生素 C 的濃度(μg/ml)
V1 : 待測(cè)液的總體積(ml) m1 : 樣品質(zhì)量(g)
1000 : μg 換算成 mg
注意事項(xiàng):
1、 Vitamin C 標(biāo)準(zhǔn)避免反復(fù)凍融,以免失效或效率下降。
2、 組織勻漿液 A 保存溫度過(guò)低時(shí)易產(chǎn)生結(jié)晶,可用溫水浴溶解后再使用。
3、 Vitamin C Assay buffer 室溫保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或者過(guò)期會(huì)出現(xiàn)白色粘稠物,不可使用,應(yīng)換新的產(chǎn)品使用。不使用時(shí)建議 4℃保存。
4、 待測(cè)樣品如不能及時(shí)測(cè)定,應(yīng)置于 2~8℃保存,3 天內(nèi)穩(wěn)定。
5、 如果樣品濃度過(guò)高,應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測(cè),結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
有效期: 6 個(gè)月有效。4℃運(yùn)輸,4℃保存。
附錄 1:標(biāo)準(zhǔn)曲線制作: 在室溫條件下按說(shuō)明書(shū)操作,用分光光度計(jì)對(duì)系列標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行吸光度的測(cè)定,其標(biāo)準(zhǔn)曲線如下(僅供參考)
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