產(chǎn)品簡介
本試劑盒提供特殊的組份可提取細(xì)胞及組織中的膜蛋白，提取Buffer采用特殊配方在裂解細(xì)胞的同時可以選擇性地分離提取細(xì)胞膜蛋白和細(xì)胞器膜蛋白。提取方法簡單、可靠、快速同時獲得的膜蛋白純度高，可用于SDS-PAGE、Western Blot、免疫共沉淀或細(xì)胞信號傳導(dǎo)等后續(xù)研究，每次可以提取107個培養(yǎng)細(xì)胞或200 mg動物組織。
本試劑盒可以使用50次。
產(chǎn)品特點
1. 整個操作過程只需要60 min左右。
2. 即可以用于培養(yǎng)細(xì)胞（50X 107個）又可以用于動物組織（50X 200 mg）蛋白質(zhì)的提取。
3. 避免蛋白酶對蛋白質(zhì)的降解，保持膜蛋白質(zhì)的完整性和天然活性。
4. 提取的膜蛋白純度高，不需要超速度離心，可以同時處理多個樣品。
運輸和保存條件
在常溫下運輸，收到后將蛋白酶抑制劑、1X Loading Buffer、DTT置于-20°C的環(huán)境中保存，其余組分置于4°C保存，保質(zhì)期兩年。
操作步驟
1. 對于懸浮培養(yǎng)或用細(xì)胞刮刮下的貼壁培養(yǎng)細(xì)胞，離心收集不少于1X 107細(xì)胞，再用預(yù)冷的雙蒸水稀釋至一倍濃度的洗滌液洗滌細(xì)胞三次，每次3000 rpm離心5 min。
2. 對于組織樣本（200 mg）盡量去除脂肪組織和結(jié)締組織等非目的組織，冰上剪碎，再用預(yù)冷雙蒸水稀釋至一倍濃度的洗滌液洗滌細(xì)胞三次。
3. 在上述細(xì)胞或組織樣本中加入1 mL提取Buffer（使用前，每mL提取Buffer中加入1 μl蛋白酶抑制劑和1 μl DTT），將組織在4°C環(huán)境下置于預(yù)冷的玻璃勻漿器中，手動勻漿30~50次，勻質(zhì)勻漿至沒有明顯的組織小塊�；�?qū)⒓?xì)胞超聲破碎，每次30 sec，3~4次，每次間隔1 min，置于冰上冷卻，超聲破碎細(xì)胞后應(yīng)鏡檢，細(xì)胞破碎率不小于90％。
4. 裝入1.5 mL的預(yù)冷的離心管中，冰上放置10 min左右，期間取出劇烈振蕩2~3次，于4°C，14000 rpm離心10 min，棄沉淀，上清轉(zhuǎn)至新管中。
5. 上清置于37°C水浴10 min。再室溫，14000 rpm離心5~20 min，樣品分成上層和下層（含膜蛋白）
6. 取下層，加入500 μl冰冷滅菌水，4°C放置5 min，再置于37°C水浴10 min。
7. 室溫，14000 rpm離心5~10 min，樣品分成上層和下層（含膜蛋白）。
8. 取下層，加入500 μl冰冷滅菌水，4°C放置5 min，再置于37°C水浴10 min。
9. 室溫，14000 rpm離心5~10 min，樣品分成上層和下層（含膜蛋白）。
10. 最終得到的下層即為膜蛋白提取物，冷凍保存。
