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熱啟動(dòng)Bst 4.2LAMP擴(kuò)增試劑

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產(chǎn)品名稱

規(guī)格 價(jià)格(元) 說(shuō)明書
A3831-00 HotStart Bst 4.2 DNA/RNA Polymerase(無(wú)甘油) 1600U 1250  
10KU 3,900
100萬(wàn)U 詢價(jià)
A3831-01 HotStart Bst 4.2 Basic Mix(可凍干) 200T(25 μl體系) 2,650
A3831-02 HotStart Bst 4.2 SYBR Green Mix(可凍干) 200T(25 μl體系) 2,650
A3831-03 HotStart Bst 4.2 Basic Bead(基礎(chǔ)凍干球) 100T(25 μl體系) 1,950
A3831-04 HotStart Bst 4.2 SYBR Green Bead(熒光凍干球) 100T(25 μl體系) 1,950
A3831-05 HotStart Bst 4.2 Red Bead(紅黃變色凍干球) 100T(25 μl體系) 1,950
A3831-06 HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead(紫綠變色凍干球) 100T(25 μl體系) 1,950

 得益于分子酶進(jìn)化技術(shù)平臺(tái)(in silico Design & invitro Evolution Workflow),并持續(xù)聚焦LAMP恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù),全新升級(jí)的Bst4.2系列,將LAMP擴(kuò)增技術(shù)推入了新的高度。Bst4.2維持了Bst4.0 DNA/RNA通擴(kuò)的能力。在現(xiàn)階段,熱啟動(dòng)HotStart Bst4.2 Polymerase為已知的LAMP擴(kuò)增最佳用酶。Bst4.2全系包含熱啟動(dòng)Aptamer,該配體確保酶在<30℃時(shí),酶活封閉效率>95%,在>60℃時(shí)1min內(nèi)完全釋放酶活。該特性利于室溫建立反應(yīng)體系,并大幅降低了低溫條件下的非特異擴(kuò)增。并且耐熱性進(jìn)一步提升到70℃。由于擴(kuò)增性能得到質(zhì)的提升,使得LAMP引物篩選難度大幅下降,更易于獲得穩(wěn)定的擴(kuò)增結(jié)果和可靠的終端產(chǎn)品。Bst4.2系列性能如下:
(1)試劑反應(yīng)溫度提升到70℃,提供更加嚴(yán)謹(jǐn)?shù)囊锱鋵?duì)條件,大幅降低了引物Dimer效應(yīng)。在此條件下,引物篩選難度大幅降低,利于研究及開發(fā)人員的引物篩選。除此外,高溫反應(yīng)使得粗樣本的核酸釋放更加充分,易于核酸免提取檢測(cè),且致病菌毒滅活更加充分。
(2)試劑中加入了最新開發(fā)的Helicaser(解旋因子),使得“啞鈴”結(jié)構(gòu)底物的形成,可以依靠Helicaser來(lái)完成。因此,標(biāo)準(zhǔn)LAMP中的F3/B3引物可以完全移除。同時(shí)Helicaser具有協(xié)助解鏈的功能,使得FIP/BIP引物使用濃度進(jìn)一步下降。此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)方案由我司測(cè)試建立,并命名為eLAMP (Easy LAMP)。

(3)高親和力的HotStart Aptamer確保聚合酶30℃以下,酶活殘留<5%,熱啟動(dòng)效應(yīng)遠(yuǎn)高于N公司制品。高親和力的Aptamer使得反應(yīng)體系易于建立,并維持均一的擴(kuò)增性能。
(4)全新開發(fā)的L-HNB顯色技術(shù)(Leuco-HNB),解決了HNB反應(yīng)完畢后,顏色對(duì)比不明顯的問題。同時(shí)保留了HNB對(duì)緩沖液、樣品的耐受度的優(yōu)點(diǎn)。該變色方法,適用性遠(yuǎn)優(yōu)于基于pH變色的可視化法。

性能展示

1、Bst 4.2 HotStart功能展示
采用熒光酶活測(cè)定法在30℃和60℃條件下測(cè)定HotStart Bst 4.2,結(jié)果顯示與未加入Aptamer的對(duì)照比較來(lái)看。HotStart Bst 4.2在30℃條件下酶活幾乎無(wú)活性,而60℃條件下1min內(nèi)酶活完全釋放,恢復(fù)100%活性。
熱啟動(dòng)LAMP
 
2、以Bst 4.2 SYBR Green試劑進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)LAMP和eLAMP擴(kuò)增比較
以human Total RNA為模板,采用RnaseP LAMP Primer進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)LAMP和eLAMP 擴(kuò)增。在25ul擴(kuò)增體系中加入10ng、1ng和0ng的RNA,70℃反應(yīng)40min。從擴(kuò)增結(jié)果可獲得,在Helicaser的加持下F3/B3可完全去除,對(duì)擴(kuò)增速度幾乎無(wú)影響,并且非特異性擴(kuò)增得到改善。 6 Primer LAMP引物濃度:FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM; F3/B3=0.1 μM。 4 Primer eLAMP引物濃度:FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM。
 
熱啟動(dòng)熒光法LAMP
 
3、以Bst 4.2 Basic試劑進(jìn)行DP-eLAMP探針法擴(kuò)增
在眾多的探針法LAMP測(cè)試中,DP-LAMP探針法(Displaceable Probe LAMP)為HaiGene推薦的使用方法(參考PMID: 33626039)。在LAMP擴(kuò)增中將LF或LB引物退火至互補(bǔ)的猝滅oligo,利用鏈置換活性獲得游離的熒光信號(hào)(可參考HaiGene A3831-21說(shuō)明書資料)。該方案可進(jìn)一步降低LAMP的非特異擴(kuò)增。下圖為DP-eLAMP進(jìn)行三種熒光標(biāo)記探針的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。結(jié)果顯示HotStart Bst4.2總能獲得高特異性和高重復(fù)性的擴(kuò)增。
 
熱啟動(dòng)探針法LAMP
 
4、以Bst4.2 L-HNB 試劑進(jìn)行L-HNB (紫羅蘭-淡綠) 變色反應(yīng)(肉眼觀察)
以2019-nCoV體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,采用eLAMP擴(kuò)增法(FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM), 對(duì)10000、1000、100、25copies/管的陽(yáng)性RNA進(jìn)行檢測(cè),ddH20為陰性對(duì)照(4重復(fù))。下圖為70℃反應(yīng)30min 后的檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果表明L-HNB法獲得清晰易于區(qū)分的顏色變化,極易區(qū)分陽(yáng)性和陰性擴(kuò)增。
 
熱啟動(dòng)LAMP 紫綠變色
 
5、 以Bst4.2 L-HNB (紫羅蘭-淡綠) 變色反應(yīng)對(duì)反應(yīng)緩沖鹽Tris的耐受性測(cè)試
以2019-nCoV體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,采用eLAMP擴(kuò)增法(FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM), 對(duì)1000copies/管的陽(yáng)性RNA進(jìn)行檢測(cè)(2重復(fù)),ddH20為陰性對(duì)照(2重復(fù))。下圖為70℃反應(yīng)30min 后的檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果表明L-HNB法,在1x濃度下可耐受10mM Tris-HCl的緩沖鹽,陽(yáng)性樣本仍然可以充分的變色。該變色方法不受樣本中緩沖鹽影響。
 
熱啟動(dòng)LAMP 紫綠變色
 
6、 以Bst4.2 Red試劑進(jìn)行LAMP紅黃變色擴(kuò)增
以2019-nCoV體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起始前,下圖為70℃反應(yīng)30min后。
 
熱啟動(dòng)LAMP 紅黃變色
 
7、 以Bst 4.2 Basic試劑搭配 OG 橙綠變色反應(yīng)管(A3821)
以2019-nCoV體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起始前,下圖為70℃反應(yīng)30min后。
熱啟動(dòng)LAMP 橙綠變色
 

 

 

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