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細(xì)胞缺氧檢測(cè)試劑盒-紅色熒光

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產(chǎn)品概述 product description

O92細(xì)胞缺氧檢測(cè)試劑盒是一種利用O92紅色熒光探針進(jìn)行細(xì)胞缺氧狀態(tài)檢測(cè)的試劑盒。  O92熒光探針可自由透過(guò)活細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),并與細(xì)胞內(nèi)的缺氧損傷產(chǎn)物反應(yīng),形成紅色熒光產(chǎn)物,產(chǎn)生紅色熒光。紅色熒光隨著缺氧程度的增加而增強(qiáng)。因此,根據(jù)活細(xì)胞中紅色熒光的產(chǎn)生,可以判斷細(xì)胞缺氧的變化。 用激光共聚焦/熒光顯微鏡可直接檢測(cè)觀察或流式細(xì)胞儀/熒光酶標(biāo)儀/光度計(jì)檢測(cè),是一種快速簡(jiǎn)便的細(xì)胞中缺氧變化的檢測(cè)方法。 O92在激發(fā)波長(zhǎng)536 nm,發(fā)射波長(zhǎng)580 nm附近,使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀等檢測(cè)熒光,從而測(cè)定細(xì)胞內(nèi)缺氧狀況。 本試劑盒可以用于各種真核培養(yǎng)細(xì)胞、培養(yǎng)或灌流組織及新鮮組織振動(dòng)/冰凍切片的檢測(cè)。  O9系列缺氧檢測(cè)熒光探針有各種顏色可供選擇,除了本試劑盒的紅色熒光探針外,貝博還可以提供綠色、橙色、紫色等不同試劑盒選擇。 缺氧是惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中普遍存在的現(xiàn)象,其產(chǎn)生主要與腫瘤無(wú)限制生長(zhǎng)、氧耗增加、血供不足及腫瘤組織血管發(fā)育不良等有關(guān),也是臨床多種疾病共有的病理過(guò)程。缺氧環(huán)境下的腫瘤細(xì)胞易發(fā)生轉(zhuǎn)移,并且能增加對(duì)放療、化療的抗拒性,從而降低了治療效果。因此,研究缺氧的發(fā)生和發(fā)展規(guī)律,對(duì)臨床治療、增強(qiáng)機(jī)體代償適應(yīng)能力都有重要意義。 細(xì)胞缺氧通常可導(dǎo)致胞內(nèi)的硝基還原酶(Nitroreductase,NTR)的增加。在缺氧條件下,以還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(Reduced nic-otinamide adenine dinucleotide,NADH)作為電子供體,細(xì)胞內(nèi)的硝基還原酶可催化多種外源硝基芳香族化合物發(fā)生單電子轉(zhuǎn)移,生成硝基陰離子自由基,隨后進(jìn)一步被還原成羥胺或氨基。 細(xì)胞缺氧通常通過(guò)HIF蛋白表達(dá)、基因表達(dá)、細(xì)胞活性等方法檢測(cè),但是這些方法比較麻煩,對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的熟練程度要求,O92細(xì)胞缺氧檢測(cè)試劑盒通過(guò)細(xì)胞缺氧后的氧化應(yīng)激反應(yīng)檢測(cè)細(xì)胞的缺氧損傷,能夠簡(jiǎn)單快捷的反映的細(xì)胞缺氧損傷的情況。 包括細(xì)胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、細(xì)胞代謝、氧化應(yīng)激、膜流動(dòng)性、膜電位、膜通透性轉(zhuǎn)換孔、細(xì)胞耗氧率、胞外酸化、細(xì)胞內(nèi)pH、細(xì)胞粘附、細(xì)胞自噬等數(shù)百種細(xì)胞檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品。  可以為您提供各種細(xì)胞成像、細(xì)胞示蹤與追蹤試劑盒產(chǎn)品。包括各種顏色的 M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、溶酶體、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、骨架、微管等細(xì)胞、細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)熒光染色試劑盒產(chǎn)品,以及鈣離子、鈉離子、氬離子等各種熒光染色試劑盒產(chǎn)品?梢蕴峁﹦(dòng)物、植物、微生物、酵母、水產(chǎn)、家禽、獸類(lèi)、土壤等樣本的各種生化指標(biāo)檢測(cè)的數(shù)百種試劑盒產(chǎn)品?梢蕴峁└鞣N細(xì)胞、組織染色,免疫組織化學(xué),細(xì)胞培養(yǎng)等相關(guān)試劑盒產(chǎn)品。

保存溫度
-20℃ 避光
注意事項(xiàng)
1.探針長(zhǎng)期不用可以-20℃保存。
2.探針需密封保存。減少開(kāi)蓋次數(shù)。
3.避免反復(fù)凍融?梢愿鶕(jù)需要分裝后凍存。
4.探針液A為DMSO溶液,冬季氣溫較低時(shí)為凝固狀態(tài),極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。
5.可以用手捂住使其融解或37℃短時(shí)間水浴。吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱,否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。
6.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完!
 
有效期
6個(gè)月
檢測(cè)方法
1.熒光顯微鏡 2.流式細(xì)胞儀 3.激光共聚焦4.熒光酶標(biāo)儀
適用樣本
1.懸浮細(xì)胞 2.貼壁細(xì)胞
產(chǎn)品特點(diǎn)
1.使用方便:可用激光共聚焦顯微鏡直接觀察、熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測(cè);
2.背景低,靈敏度高;
3.線性范圍寬,使用方便。
產(chǎn)品應(yīng)用
細(xì)胞代謝研究
儀器準(zhǔn)備
1.熒光顯微鏡/流式細(xì)胞儀/激光共聚焦/熒光酶標(biāo)儀
2.離心機(jī)
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
試劑準(zhǔn)備
PBS緩沖液或者HBSS
耗材準(zhǔn)備
1.黑色透明底熒光專(zhuān)用96孔培養(yǎng)板
2.離心管
3.吸頭
4.一次性手套
使用注意事項(xiàng)
1.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。
2.熒光探針標(biāo)記后,一定要洗凈殘余的未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針,否則會(huì)導(dǎo)致背景較高。
3.探針標(biāo)記完畢并洗凈殘余探針后,可以進(jìn)行激發(fā)波長(zhǎng)的掃描和發(fā)射波長(zhǎng)的掃描,以確認(rèn)探針的標(biāo)記情況是否正常。
4.盡量縮短探針標(biāo)記后到測(cè)定所用的時(shí)間,以減少各種可能的誤差。
5.O92在光照和空氣中易被氧化,注意避光密封保存。
6.對(duì)不同的細(xì)胞和組織,應(yīng)選擇合適的孵育時(shí)間和濃度,以觀察缺氧的變化。
 
使用方法
 O92探針標(biāo)記:
O92溶液可在新鮮無(wú)血清培養(yǎng)液、PBS、HBSS、HEPES等緩沖鹽溶液中稀釋到所需濃度,100-1000倍稀釋?zhuān)源巳旧焊鼡Q細(xì)胞培養(yǎng)液;也可直接向細(xì)胞孵育液體中加入B O92探針溶液至所需濃度。
2. 依據(jù)細(xì)胞缺氧程度的不同,O92終濃度可選擇在100-1000倍稀釋的范圍,孵育時(shí)間可選擇60-120 分鐘,在37℃進(jìn)行避光孵育。
3. 孵育結(jié)束后,用新鮮溶液清洗細(xì)胞。
4. 檢測(cè)細(xì)胞熒光。

共聚焦/熒光顯微鏡檢測(cè):
1. 對(duì)貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞或活組織,可直接在熒光顯微鏡下觀察;對(duì)懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞,取25-50μl細(xì)胞懸液滴到一張顯微載玻片上,再蓋上一張蓋玻片。
2. 熒光顯微鏡下,用藍(lán)光或綠光激發(fā),觀察和拍攝細(xì)胞紅色發(fā)射圖像,缺氧細(xì)胞被染成紅色。

流式細(xì)胞儀分析:
對(duì)貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞,用胰酶消化制備成單細(xì)胞懸液;對(duì)懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞,直接收集細(xì)胞。用0.5~1 ml冷PBS重懸細(xì)胞(5~10萬(wàn))。
采用480~536 nm波長(zhǎng)激發(fā),測(cè)定580 nm~610 nm的發(fā)射。
陰性細(xì)胞僅有較低的熒光強(qiáng)度,缺氧細(xì)胞有較強(qiáng)的紅色熒光。 【注】:
 細(xì)胞可能分成兩個(gè)亞群。
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