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細胞缺氧檢測試劑盒-綠色熒光

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 產(chǎn)品概述 product description

缺氧是惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中普遍存在的現(xiàn)象,其產(chǎn)生主要與腫瘤無限制生長、氧耗增加、血供不足及腫瘤組織血管發(fā)育不良等有關(guān),也是臨床多種疾病共有的病理過程。缺氧環(huán)境下的腫瘤細胞易發(fā)生轉(zhuǎn)移,并且能增加對放療、化療的抗拒性,從而降低了治療效果。因此,研究缺氧的發(fā)生和發(fā)展規(guī)律,對臨床治療、增強機體代償適應(yīng)能力都有重要意義。 細胞缺氧通?蓪(dǎo)致胞內(nèi)的硝基還原酶(Nitroreductase,NTR)的增加。在缺氧條件下,以還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(Reduced nic-otinamide adenine dinucleotide,NADH)作為電子供體,細胞內(nèi)的硝基還原酶可催化多種外源硝基芳香族化合物發(fā)生單電子轉(zhuǎn)移,生成硝基陰離子自由基,隨后進一步被還原成羥胺或氨基。 細胞缺氧通常通過HIF蛋白表達、基因表達、細胞活性等方法檢測,但是這些方法比較麻煩,對實驗操作的熟練程度要求,O91細胞缺氧檢測試劑盒通過細胞缺氧后的氧化應(yīng)激反應(yīng)檢測細胞的缺氧損傷,能夠簡單快捷的反映的細胞缺氧損傷的情況。 O91細胞缺氧檢測試劑盒是一種利用O91綠色熒光探針進行細胞缺氧狀態(tài)檢測的試劑盒。 O91熒光探針可自由透過活細胞膜進入細胞內(nèi),并與細胞內(nèi)的缺氧損傷產(chǎn)物反應(yīng),形成綠色熒光產(chǎn)物,產(chǎn)生綠色熒光。綠色熒光隨著缺氧程度的增加而增強。因此,根據(jù)活細胞中綠色熒光的產(chǎn)生,可以判斷細胞缺氧的變化。用流式細胞儀或熒光顯微鏡可直接檢測觀察,是一種快速簡便的細胞中缺氧變化的檢測方法。 O91在激發(fā)波長488nm,發(fā)射波長526 nm附近,使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計、熒光酶標儀、流式細胞儀等檢測熒光,從而測定細胞內(nèi)缺氧狀況。 本試劑盒可以用于各種真核培養(yǎng)細胞、培養(yǎng)或灌流組織及組織冰凍切片的檢測。 O9系列缺氧檢測熒光探針有各種顏色可供選擇,除了本試劑盒的綠色熒光探針外,還可以提供紅色、橙色、紫色等不同試劑盒選擇。 可以提供細胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、細胞代謝、氧化應(yīng)激、細胞膜流動性、膜通透性轉(zhuǎn)換孔、細胞耗氧率、細胞內(nèi)pH、細胞粘附、細胞自噬等數(shù)百種檢測試劑盒產(chǎn)品。  可以為您提供各種顏色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等細胞膜、細胞質(zhì)、細胞核、溶酶體、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、骨架、微管等細胞、細胞亞結(jié)構(gòu)熒光染色試劑盒產(chǎn)品,以及鈣離子、鈉離子、氬離子等各種熒光染色試劑盒產(chǎn)品。  可以提供動物、植物、微生物、酵母、水產(chǎn)、家禽、獸類、土壤等樣本的各種生化指標檢測的數(shù)百種試劑盒產(chǎn)品。

保存溫度
-20℃ 避光
注意事項
1.探針長期不用可以-20℃保存。
2.探針需密封保存。減少開蓋次數(shù)。
3.避免反復(fù)凍融?梢愿鶕(jù)需要分裝后凍存。
4.探針液A為DMSO溶液,冬季氣溫較低時為凝固狀態(tài),極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
5.可以用手捂住使其融解或37℃短時間水浴。吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱,否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。
6.試劑拆封后請盡快使用完!
 
有效期
6個月
檢測方法
1.熒光顯微鏡 2.流式細胞儀 3.激光共聚焦4.熒光酶標儀
適用樣本
1.懸浮細胞 2.貼壁細胞
產(chǎn)品特點
1.使用方便:可用激光共聚焦顯微鏡直接觀察、熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測;
2.背景低,靈敏度高;
3.線性范圍寬,使用方便。
產(chǎn)品應(yīng)用
細胞代謝研究
儀器準備
1.熒光顯微鏡/流式細胞儀/激光共聚焦/熒光酶標儀
2.離心機
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
試劑準備
PBS緩沖液或者HBSS
耗材準備
1.黑色透明底熒光專用96孔培養(yǎng)板
2.離心管
3.吸頭
4.一次性手套
使用注意事項
1.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底,避免開蓋時液體灑落。
2.熒光探針在2-8℃時是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.熒光探針標記后,一定要洗凈殘余的未進入細胞內(nèi)的探針,否則會導(dǎo)致背景較高。
4.探針標記完畢并洗凈殘余探針后,可以進行激發(fā)波長的掃描和發(fā)射波長的掃描,以確認探針的標記情況是否正常。
5.盡量縮短探針標記后到測定所用的時間,以減少各種可能的誤差。
6.O91在光照和空氣中易被氧化,注意避光密封保存。
7.對不同的細胞和組織,應(yīng)選擇合適的孵育時間和濃度,以觀察缺氧的變化。
 
使用方法
 O91探針標記:
原位標記:僅適用于貼壁培養(yǎng)細胞。
1. 按照1:1000-10000用無血清培養(yǎng)基稀釋O91探針。
2. 去除細胞培養(yǎng)基,用PBS洗細胞一次。
3. 加入適當(dāng)體積稀釋好的O91探針。加入的體積以能充分蓋住細胞為宜,通常對于96孔板每孔加入200 μl染色液,六孔板的一個孔加入稀釋好的BO91探針不少于1毫升。
4. 在37℃細胞培養(yǎng)箱內(nèi)避光孵育10-60分鐘。
5. 用無血清細胞培養(yǎng)液洗滌細胞三次,以充分去除未進入細胞內(nèi)的O91探針。
6. 用PBS重懸細胞。
7. 檢測細胞熒光。

收集后標記:懸浮細胞或貼壁細胞消化處理
1. 按照1:1000-10000倍用無血清培養(yǎng)基稀釋 O91探針。
2. 離心移除培養(yǎng)基,用PBS洗細胞一次。
3. 細胞收集后懸浮于稀釋好的O91探針中,細胞濃度為1*106-2*107/毫升,37℃細胞培養(yǎng)箱內(nèi)避光孵育10-60分鐘。每隔3-5分鐘顛倒混勻一下,使探針和細胞充分接觸。
4. 用無血清細胞培養(yǎng)基洗滌細胞三次,以充分去除未進入細胞內(nèi)的O91探針。
5. 用PBS重懸細胞。
6. 檢測細胞熒光。

共聚焦/熒光顯微鏡/酶標儀檢測:
1. 對貼壁生長細胞或活組織,可直接在熒光顯微鏡下觀察;對懸浮生長細胞,取25-50μl細胞懸液滴到一張顯微載玻片上,再蓋上一張蓋玻片。
2. 熒光顯微鏡下,用藍光激發(fā),觀察和拍攝細胞綠色發(fā)射圖像,缺氧損傷細胞綠色熒光強度增加。

流式細胞儀分析:
對貼壁生長細胞,用胰酶消化制備成單細胞懸液;對懸浮生長細胞,直接收集細胞。用0.5~1 ml冰冷PBS重懸細胞(5~10萬)。
采用488 nm波長激發(fā),測定500-526 nm的發(fā)射。
缺氧細胞有較強的綠色熒光強度增加。
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