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雞新城疫血凝抑制試驗(yàn)抗原、陽(yáng)性血清與陰性血清

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批準(zhǔn)文號(hào):  獸藥生字 154028082 

名稱(chēng):雞新城疫血凝抑制試驗(yàn)抗原、陽(yáng)性血清與陰性血清

品名稱(chēng):無(wú)

英文名稱(chēng):  Newcastle Disease Hemagglutination Inhibition Test Antigen Positive Sera and Negative Sera

語(yǔ)拼音:Ji Xinchengyi Xueningyizhishiyan Kangyuan,Yangxingxueqing Yu Yinxingxueqing

 

抗原含有滅活的雞新城疫病毒,血凝效價(jià)應(yīng)≥1:512 。陽(yáng)性血清為雞新城疫高免的 SPF  血清,  HI 效價(jià)應(yīng)≥1:512。陰性血清為 SPF 雞血清。

 

抗原微黃色海綿狀疏松團(tuán)塊,易與瓶壁脫離,加稀釋液后迅速溶解;陽(yáng)性血清和陰性 均為微黃色海綿狀疏松團(tuán)塊,易與瓶壁脫離,加稀釋液后迅速溶解。

           用于血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)雞新城疫抗體。

 

1     血凝(HA)試驗(yàn)操作方法

1.1 V 型微量反應(yīng)板中,每孔加 0.025ml PBS 。

1.2 1 孔加入 0.025ml 抗原,依次作 0.025ml 的對(duì)倍稀釋至第 11 孔;為精確計(jì)算血凝 單位,病毒懸液開(kāi)始需作一系列集稀釋?zhuān)?/font> 1/3 、1/4 、1/5 、1/6 等。

1.3  每孔加 0.025ml PBS 溶液。

1.4 孔加 0.025ml 1%  (V/V) 雞紅細(xì)胞懸液。

1.5  將反應(yīng)板在振蕩器上振蕩 1~2 分鐘或輕叩反應(yīng)板混合反應(yīng)物,室溫(20~25℃)靜 15~30 分鐘或2~845~60 分鐘,當(dāng)對(duì)照孔的紅細(xì)胞顯著呈紐扣狀時(shí)判定結(jié)果。

1.6 結(jié)果判定 將反應(yīng)板傾斜 60°,觀察紅細(xì)胞有無(wú)呈淚珠樣流淌,完全無(wú)淚珠樣流淌(100% ) 的最高稀釋倍數(shù)為血凝效價(jià)。表示 1 個(gè) HA 單位(HAU),再根據(jù)開(kāi)始的稀釋倍數(shù)精確  計(jì)算血凝效價(jià)。

2     血凝抑制(HI)試驗(yàn)操作方法

2. 1  根據(jù) HA 測(cè)定的效價(jià),計(jì)算配制 4 個(gè)血凝單位(4HAU)抗原。


 

 

 

2.2  反應(yīng)板中每孔加入 0.025ml PBS。

2.3   1 孔中加入 0.025ml 血清。

2.4 在反應(yīng)板上將血清做橫向 0.025ml 的對(duì)倍稀釋?zhuān)恋?/font> 10 孔。

2.5 在第 1 孔至第 11 孔中,每孔加入 0.025ml  4HAU 抗原,室溫下(20~25℃)靜置 30 分鐘或 2~845~60 分鐘。

2.6 每孔加入 0.025ml 1% (V/V) 的雞紅細(xì)胞懸液,輕晃混勻后,室溫(20~25℃)靜置 20~40 分鐘或 2~845~60 分鐘,當(dāng)對(duì)照孔紅細(xì)胞呈顯著紐扣狀時(shí)判定結(jié)果。

2.7 結(jié)果判定  以完全抑制 4HAU 抗原的最高血清稀釋倍數(shù)判為該血清的 HI 效價(jià)。當(dāng)陽(yáng)性 血清的 HI 效價(jià)與已知效價(jià)誤差不超過(guò) 1 個(gè)滴度,  陰性血清效價(jià)不高于 1:4 時(shí),試驗(yàn)方可成立。 被檢樣品 HI 效價(jià)≤1:4 判為陰性;等于 1:8 判為可疑(可疑樣品應(yīng)重檢,重檢效價(jià)≥1:8 判為陽(yáng)性, 1:8 判為陰性); 1:16 判為陽(yáng)性。

 

(1) HA  HI 試驗(yàn)影響因素甚多,  應(yīng)嚴(yán)格控制試驗(yàn)條件,  準(zhǔn)確控制紅細(xì)胞懸液和抗原工 度,同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制溫度和作用時(shí)間。

(2)  pH  7.0~7.2 PBS 作稀釋液。

(3) 抗原和陰、陽(yáng)性血清若有污染,應(yīng)廢棄。

(4) 使用時(shí)應(yīng)先測(cè)抗原的血凝價(jià),根據(jù)所測(cè)結(jié)果,配制4 個(gè)血凝單位的抗原,配好后的抗原 應(yīng)在2 小時(shí)內(nèi)用完。

(5)抗原開(kāi) 2~8℃保存,  應(yīng)不超過(guò) 3 個(gè)月。切忌反復(fù)凍融。

抗原、陽(yáng)性血清和陰血清: (1) 1ml/  (2) 2ml/

2~8保存,抗原、陽(yáng)性血清和陰性血清有效期均為 24 個(gè)月。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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