產(chǎn)品概述 product description
固定細(xì)胞蛋白提取試劑盒適用于從各種固定的細(xì)胞樣本中提取總蛋白，適用于乙醇固定、甲醛固定、多聚甲醛固定、其它混合固定液固定的細(xì)胞樣本。 提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。 提供針對(duì)動(dòng)物細(xì)胞、組織、植物、真菌、酵母、微生物、藻類、液體、土壤等各種不同樣本的蛋白提取試劑盒。 可以提供針對(duì)細(xì)胞膜、核、胞質(zhì)、線粒體、溶酶體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、外泌體等細(xì)胞不同部位的蛋白提取試劑盒。
保存溫度
2-8℃
注意事項(xiàng)
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！
有效期
一年
檢測(cè)方法
WB,IP等
適用樣本
動(dòng)物細(xì)胞
產(chǎn)品應(yīng)用
WB,IP等
儀器準(zhǔn)備
1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
試劑準(zhǔn)備
1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
2.蛋白定量試劑盒
耗材準(zhǔn)備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項(xiàng)
使用注意事項(xiàng)：
旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
使用方法
1. 提取液制備：
每500ul蛋白提取液中加入5ul蛋白提取液B，混勻后備用。
2. 每1×107個(gè)細(xì)胞中加入500ul蛋白提取液，渦旋振蕩10秒。
3. 在恒溫器（Heat Block）或水浴鍋中100℃保溫20分鐘。
4. 渦旋振蕩10秒混勻。
5. 在恒溫器（Heat Block）或水浴鍋中60℃保溫1-2小時(shí)。
6. 渦旋振蕩10秒混勻。
7. 在12000×g條件下離心10分鐘。
8. 將上清吸入另一干凈離心管，即可得到總蛋白。
9. 將上述蛋白提取物定量后分裝保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。
每500ul蛋白提取液中加入5ul蛋白提取液B，混勻后備用。
2. 每1×107個(gè)細(xì)胞中加入500ul蛋白提取液，渦旋振蕩10秒。
3. 在恒溫器（Heat Block）或水浴鍋中100℃保溫20分鐘。
4. 渦旋振蕩10秒混勻。
5. 在恒溫器（Heat Block）或水浴鍋中60℃保溫1-2小時(shí)。
6. 渦旋振蕩10秒混勻。
7. 在12000×g條件下離心10分鐘。
8. 將上清吸入另一干凈離心管，即可得到總蛋白。
9. 將上述蛋白提取物定量后分裝保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。
常見問(wèn)題分析
1.蛋白濃度低？
固定的細(xì)胞組織的蛋白質(zhì)回收率較低，甲醛固定樣本回收率在30%左右。
需要加大細(xì)胞組織樣本上樣量，調(diào)整提取液用量來(lái)調(diào)整蛋白濃度。
2.WB做不出來(lái)？
固定樣本的蛋白質(zhì)回收率在30%左右。低豐度蛋白通常較難檢出。
甲醛固定的蛋白質(zhì)末端基團(tuán)與甲醛之間形成交聯(lián)鏈，各種氨基，亞氨基及酰氨基，肽，胍基，羥基，SH和芳香環(huán)等都會(huì)參與甲醛固定蛋白質(zhì)的基團(tuán)反應(yīng)，在這個(gè)過(guò)程中，絕大部分常規(guī)的暴露抗原決定基團(tuán)遭到破壞，從甲醛固定樣本回收的蛋白質(zhì)做WB成功的概率較低，最好選用抗體說(shuō)明書上同時(shí)可以做WB和IHC的抗體。
固定的細(xì)胞組織的蛋白質(zhì)回收率較低，甲醛固定樣本回收率在30%左右。
需要加大細(xì)胞組織樣本上樣量，調(diào)整提取液用量來(lái)調(diào)整蛋白濃度。
2.WB做不出來(lái)？
固定樣本的蛋白質(zhì)回收率在30%左右。低豐度蛋白通常較難檢出。
甲醛固定的蛋白質(zhì)末端基團(tuán)與甲醛之間形成交聯(lián)鏈，各種氨基，亞氨基及酰氨基，肽，胍基，羥基，SH和芳香環(huán)等都會(huì)參與甲醛固定蛋白質(zhì)的基團(tuán)反應(yīng)，在這個(gè)過(guò)程中，絕大部分常規(guī)的暴露抗原決定基團(tuán)遭到破壞，從甲醛固定樣本回收的蛋白質(zhì)做WB成功的概率較低，最好選用抗體說(shuō)明書上同時(shí)可以做WB和IHC的抗體。
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