產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
考馬斯亮藍(lán)G250 染料試劑
Bradford 法是常用的蛋白濃度檢測(cè)的方法，與傳統(tǒng)方法相比，更簡(jiǎn)單、更穩(wěn)定、兼容性更好。Bradford 法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達(dá) 1M，DTT
的濃度可高達(dá) 5mM。但受高濃度的去垢劑的影響明顯， 故在用 Bradford Protein Assay Kit 進(jìn)行蛋白定量時(shí)，需確保 SDS 低于 0.01%，Triton X-100低于 0.05%，Tween 20, 60, 80 低于 0.015%，含高濃度
去污劑的蛋白定量，建議采用 BCA Protein Assay Kit。
考馬斯亮藍(lán) G250 染料試劑由考馬斯亮藍(lán) G250、乙醇、磷酸組成，用于考馬斯染料結(jié)合(Bradford)分析的總蛋白測(cè)量，其特點(diǎn)在于對(duì)蛋白樣品中可能存在的大多數(shù)鹽、溶劑、緩沖液、硫醇、金屬螯合
劑、還原性物質(zhì)等均不排斥。檢測(cè)濃度下限達(dá)到 25μ g/ml，最小檢測(cè)蛋白量達(dá)到 0.5μg，待測(cè)樣品體積為 1～20μl，在 50~1000μg/ml 濃度范圍內(nèi)有較好的線(xiàn)性關(guān)系。
產(chǎn)品組成：
| 編號(hào) 名稱(chēng) |
YS0010 |
YS0010 |
Storage |
| 考馬斯亮藍(lán) G250 染料試劑 | 100ml | 500ml | RT |
| 使用說(shuō)明書(shū) | 1 份 | ||
自備材料：
1、酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)
2、蒸餾水
3、96 孔板或比色杯
操作步驟(僅供參考)：
1、稀釋蛋白標(biāo)準(zhǔn)(一般為 BSA 5mg/ml)使其終濃度為 0.5mg/ml。注意：蛋白樣品在什么溶液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)用什么溶液稀釋?zhuān)部梢杂?0.9%NaCl 或 PBS 稀釋蛋白標(biāo)準(zhǔn)。
2、將標(biāo)準(zhǔn)品按 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl 加到 96 孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)孔中，加蛋白標(biāo)準(zhǔn)稀釋液補(bǔ)足至 20μl。
3、加適當(dāng)體積樣品到 96 孔板的樣品孔中，補(bǔ)加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液至 20μl。
4、各孔加入 200μl 考馬斯亮藍(lán) G250 染料試劑，室溫放置 3～5min。
5、酶標(biāo)儀測(cè)定 595nm 波長(zhǎng)處的吸光值，560~610nm 之間的波長(zhǎng)也可。
6、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出樣品中的蛋白濃度。
注意事項(xiàng)：
1、 待測(cè)蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測(cè)蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致，有可能導(dǎo)致測(cè)定不準(zhǔn)確。
2、 需可檢測(cè) 560~610nm 之間波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀一臺(tái)，最佳檢測(cè)波長(zhǎng)為 595nm。
3、 建議每次測(cè)定時(shí)都做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。因?yàn)闇y(cè)定時(shí)顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時(shí)間和溫度，否則如需精確測(cè)定應(yīng)每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
4、 如果沒(méi)有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定，但測(cè)定時(shí)，考慮根據(jù)比色皿的最小檢測(cè)體積。應(yīng)按比例適當(dāng)加大考馬斯亮藍(lán) G250 染料試劑的用量使總體積不小于最小檢測(cè)體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量亦相應(yīng)
按比例放大。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí)，每個(gè)試劑盒可以測(cè)定的樣品數(shù)量可能會(huì)顯著減少。
5、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期： 12 個(gè)月有效。
