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本產(chǎn)品就是根據(jù)PCR原理專門開發(fā)的試劑盒,它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
3. 產(chǎn)品精心優(yōu)化且特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟除此之外的其它微生物DNA發(fā)生交叉反應。
4. PCR mix中含上樣染料,PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的PCR反應。
6. 本產(chǎn)品只能用于定性實驗,不能用于定量。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研
樣品的制備
1. 如果有N個樣品,必須設(shè)置N+2個提取反應,多出的兩個中一個是 PC(樣品制備陽性對照),一個是 NC(樣品制備陰性對照)。可以用 10μL 牛乳頭瘤病毒 PCR 陽性對照(1×10E6 拷貝/μL,本試劑盒提供)再加上一定量的水作為制備的陽性對照(加水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求)?梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫φ铡
2. 用自選方法純化上述 N+2 個樣品的 DNA。本試劑盒跟市場上大多數(shù)細菌DNA提取試劑盒兼容。
電泳分析
1. 取 5-10uL 擴增產(chǎn)物進行常規(guī)瓊脂糖電泳,檢測擴增效果,由于擴增產(chǎn)物較短,建議用 1.5%-2.0%的瓊脂糖凝膠。
2. 陽性樣品預期得到的擴增產(chǎn)物長度為 200bp 左右。如果兩個陰性對照(樣品制備陰性對照或 PCR 陰性對照)有此擴增產(chǎn)物,說明環(huán)境污染,則整個實驗無效,不需要分析實驗結(jié)果。
3. 如果所有樣品和 PCR 陽性對照均無此擴增產(chǎn)物,則說明有系統(tǒng)性的問題(試劑、設(shè)備、程序、操作等),需要重復并排查原因。
4. 如果沒有上述兩種情況,則實驗有效,可以分析樣品的擴增結(jié)果。N+2 個樣品中有擴增產(chǎn)物的判定為陽性,無則判定為陰性。