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本產(chǎn)品就是根據(jù)PCR原理專門開發(fā)的試劑盒,它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 提供陽性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
3. 產(chǎn)品精心優(yōu)化且特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟除此之外的其它微生物DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
4. PCR mix中含上樣染料,PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的PCR反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于定性實(shí)驗(yàn),不能用于定量。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研
樣品的制備
1. 如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取反應(yīng),多出的兩個(gè)中一個(gè)是 PC(樣品制備陽性對(duì)照),一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對(duì)照)?梢杂 10μL 牛乳頭瘤病毒 PCR 陽性對(duì)照(1×10E6 拷貝/μL,本試劑盒提供)再加上一定量的水作為制備的陽性對(duì)照(加水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求)。可以用水作為制備的陰性對(duì)照。
2. 用自選方法純化上述 N+2 個(gè)樣品的 DNA。本試劑盒跟市場上大多數(shù)細(xì)菌DNA提取試劑盒兼容。
電泳分析
1. 取 5-10uL 擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行常規(guī)瓊脂糖電泳,檢測(cè)擴(kuò)增效果,由于擴(kuò)增產(chǎn)物較短,建議用 1.5%-2.0%的瓊脂糖凝膠。
2. 陽性樣品預(yù)期得到的擴(kuò)增產(chǎn)物長度為 200bp 左右。如果兩個(gè)陰性對(duì)照(樣品制備陰性對(duì)照或 PCR 陰性對(duì)照)有此擴(kuò)增產(chǎn)物,說明環(huán)境污染,則整個(gè)實(shí)驗(yàn)無效,不需要分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
3. 如果所有樣品和 PCR 陽性對(duì)照均無此擴(kuò)增產(chǎn)物,則說明有系統(tǒng)性的問題(試劑、設(shè)備、程序、操作等),需要重復(fù)并排查原因。
4. 如果沒有上述兩種情況,則實(shí)驗(yàn)有效,可以分析樣品的擴(kuò)增結(jié)果。N+2 個(gè)樣品中有擴(kuò)增產(chǎn)物的判定為陽性,無則判定為陰性。