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IPS驗(yàn)證含酚紅基質(zhì)膠

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介:基底膜是動(dòng)物體內(nèi)上皮細(xì)胞基底面的一層基質(zhì)膜。該基質(zhì)膠是從Engelbreth-Holm-Swarm(EHS)小鼠腫瘤組織提取的基底膜成分,所形成的基質(zhì)膠。該基質(zhì)膠主要成分為laminin,collagen IV,heparan sulfate proteoglycans(Kleinman et al. 1986)。同時(shí),該基質(zhì)膠也包含多種生長(zhǎng)因子,例如表皮生長(zhǎng)因子EFG,血小板衍生生長(zhǎng)因子PDGF,神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF,堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子FGF-2,乙型轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGF-beta和胰島素樣生長(zhǎng)因子ILGF(Vukicevic et al. 1992)。

產(chǎn)品來(lái)源:

Engelbreth-Holm-Swarm(EHS) 小鼠腫瘤基底膜成分

產(chǎn)品儲(chǔ)存:

建議您融化后先按照單次用量進(jìn)行分裝,保存-20°C冰箱,有效期2年。

產(chǎn)品性質(zhì):

本品在4°C條件下為液態(tài),但在加熱到37°C時(shí)呈凝膠狀態(tài)。基質(zhì)膠凝固后,重新放回4°C過(guò)夜,基質(zhì)膠可再次液化。

注意事項(xiàng):

該基質(zhì)膠在溫度高于10°C時(shí)就會(huì)開(kāi)始凝固成膠,所以盡量在冰上操作基質(zhì)膠。類器官傳代時(shí),如果為了避免酶對(duì)類器官造成影響,可直接用4°C預(yù)冷的基礎(chǔ)培養(yǎng)基對(duì)基質(zhì)膠進(jìn)行緩慢吹打,即可將類器官?gòu)幕|(zhì)膠中釋放出來(lái)。

產(chǎn)品應(yīng)用:

本品適用于以無(wú)飼養(yǎng)層方法進(jìn)行人胚胎干細(xì)胞hES、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞ips的擴(kuò)增和維持。

操作方法:

人胚胎干細(xì)胞hES和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞ips無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)法(操作所需時(shí)間為1小時(shí))

1.將基質(zhì)膠于4°C冰箱里的冰浴中過(guò)夜解凍,并用預(yù)冷的槍頭,對(duì)基質(zhì)膠進(jìn)行緩慢吹打5次,進(jìn)行混勻。注意不要產(chǎn)生氣泡。如產(chǎn)生氣泡,通過(guò)掌上離心機(jī)低速短暫離心去除氣泡。

2.將細(xì)胞培養(yǎng)板放置于培養(yǎng)箱預(yù)熱。

3.用預(yù)冷的槍頭將解凍的基質(zhì)膠進(jìn)行分裝。

4. 用4°C預(yù)冷的無(wú)血清培養(yǎng)基將基質(zhì)膠原液以1:100的比例進(jìn)行稀釋,然后將基質(zhì)膠稀釋液均勻鋪開(kāi)并完全覆蓋培養(yǎng)板。推薦修飾培養(yǎng)板所用的基質(zhì)膠稀釋液的量為300µL/cm2。

5.將含有修飾液的培養(yǎng)板在室溫靜置一小時(shí)。

6.吸掉修飾液,并在培養(yǎng)板上立即種上干細(xì)胞與培養(yǎng)基(mTeSR1)混合液。注意一定不要讓修飾過(guò)的培養(yǎng)板表面變干。 
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