大豆胰蛋白酶胰凝乳蛋白酶抑制劑(Soybean Trypsin and Chymotrypsin Inhibitors)為BioPremium級，包含了大豆來源的Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制劑(Bowman-Birk Trypsin Inhibitor, BBTI or BBI)和Kunitz型胰蛋白酶抑制劑(Kunitz Trypsin Inhibitor, KTI)兩種蛋白組分，具有胰蛋白酶抑制劑和胰凝乳蛋白酶(也稱糜蛋白酶)抑制劑活性。本產(chǎn)品的胰蛋白酶抑制劑(Trypsin Inhibitor, TI)活性>15,000BAEE單位/mg，胰凝乳蛋白酶抑制劑(Chymotrypsin Inhibitor, CI)活性>40BTEE單位/mg，純度極高，適合生化檢測、細胞培養(yǎng)、藥用輔料等用途。本產(chǎn)品由純化的兩種抑制劑蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、純水經(jīng)制劑混合、過濾除菌、噴霧干燥而制成粉末，為白色至褐色，易溶于水，水溶液pH值呈中性。
大豆蛋白酶抑制劑(Soybean Protease Inhibitor)主要為絲氨酸蛋白酶抑制劑，根據(jù)組分的差異可抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶等蛋白酶，常用于無血清細胞培養(yǎng)、干細胞培養(yǎng)、藥用輔料或其它需要抑制蛋白酶的生化實驗，如重組蛋白生產(chǎn)中抑制絲氨酸蛋白酶的活性、特殊細胞培養(yǎng)中抑制胰蛋白酶的活性等。本大豆胰蛋白酶胰凝乳蛋白酶抑制劑從非轉(zhuǎn)基因大豆提取，純度極高，不含有其它雜蛋白酶，全部工藝過程無動物源性安全風(fēng)險。
胰蛋白酶抑制劑(Trypsin Inhibitor, TI)和凝乳蛋白酶抑制劑(Chymotrypsin Inhibitor, CI)是重要的生化試劑，來源廣泛。大豆中胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶抑制劑的活性非常高。大豆中的胰蛋白酶胰凝乳蛋白酶抑制劑，根據(jù)氨基酸組成、分子量、等電點、與不同蛋白酶的結(jié)合力以及免疫學(xué)的反應(yīng)性等特點，主要分為兩大類。一類是Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制劑(Bowman-Birk Trypsin Inhibitor, BBTI or BBI)，110個氨基酸，分子量約為10kDa，同時具有抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的特性；另一類為Kunitz型大豆胰蛋白酶抑制劑(Kunitz Trypsin Inhibitor, KTI)，216個氨基酸，分子量約為20kDa，主要具有抑制胰蛋白酶的特性。BBTI的常見氨基酸序列為：MVVLKVCLVL LFLVGGTTSA NLRLSKLGLL MKSDHQHSND DESSKPCCDQ CACTKSNPPQ CRCSDMRLNS CHSACKSCIC ALSYPAQCFC VDITDFCYEP CKPSEDDKEN；KTI的常見氨基酸序列為：MKSTIFFLFL FCAFTTSYLP SAIADFVLDN EGNPLENGGT YYILSDITAF GGIRAAPTGN ERCPLTVVQS RNELDKGIGT IISSPYRIRF IAEGHPLSLK FDSFAVIMLC VGIPTEWSVV EDLPEGPAVK IGENKDAMDG WFRLERVSDD EFNNYKLVFC PQQAEDDKCG DIGISIDHDD GTRRLVVSKN KPLVVQFQKL DKESLAKKNH GLSRSE。
三種大豆蛋白酶抑制劑電泳圖如下。
圖1. 大豆胰蛋白酶胰凝乳蛋白酶抑制劑(BioReagent)、大豆胰蛋白酶抑制劑(BioPlus)和大豆胰蛋白酶胰凝乳蛋白酶抑制劑(BioPremium)三種大豆蛋白酶抑制劑電泳圖。分別取5、10和20μg三種大豆蛋白酶抑制劑，使用BeyoGel Plus PAGE預(yù)制膠(Hepes, 4-20%, 10孔) (P0523)進行電泳，然后使用BeyoBlue考馬斯亮藍超快染色液 (P0017F)進行染色。實際檢測結(jié)果會因?qū)嶒灄l件等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。
的三種大豆蛋白酶抑制劑的參數(shù)對比見下表：
| 產(chǎn)品編號 | SG2031 | SG2033 | SG2036 |
| 級別 | BioReagent | BioPlus | BioPremium |
| 組分 | BBTI/KTI | KTI | BBTI/KTI |
| BBI/KTI比例 | ~2:1 | - | ~2:1 |
| CI活性 | ~0.5mg糜蛋白酶 | 無 | ~0.9mg糜蛋白酶 |
| CI活性(BTEE單位/mg) | >20 | 無 | >40 |
| TI活性 | ~0.9mg胰蛋白酶 | ~1.2mg胰蛋白酶 | ~1.5mg胰蛋白酶 |
| TI活性(BAEE單位/mg) | >9000 | >12,000 | >15,000 |
| 純化工藝 | 超濾 | 超濾、層析 | 超濾、層析 |
| 用途 | 生化檢測、細胞培養(yǎng) | 生化檢測、細胞培養(yǎng) | 細胞培養(yǎng)、藥用輔料 |
| 類似產(chǎn)品 | Sigma T9777 | Sigma T9003 | Sigma T9777 |
大豆胰蛋白酶胰凝乳蛋白酶抑制劑通過與蛋白酶等摩爾(1:1)有效結(jié)合形成穩(wěn)定的復(fù)合物從而封閉酶的活性位點，形成這種復(fù)合物后，胰蛋白酶可切割抑制劑中的精氨酸(arginine)-異亮氨酸(isoleucine)單鍵。大豆胰蛋白酶胰凝乳蛋白酶抑制劑對蛋白酶的抑制作用是可逆的，且具有pH依賴性，適宜的抑制胰蛋白酶pH范圍為pH6.0-10.0，在pH<5.0的條件下不與蛋白酶結(jié)合。在與胰蛋白酶結(jié)合的最佳pH值(pH8.0)條件下，締合常數(shù)(association constant, Ka)≥10×108。
在25℃、pH7.6條件下，以N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)或N-苯甲酰-酪氨酸乙酯(BTEE)為底物，每分鐘催化1μmol或每分鐘產(chǎn)生0.001的ΔA253(反應(yīng)體積=3.2ml, 1cm光程)所需酶量的胰蛋白酶量或糜蛋白酶為一個胰蛋白酶單位或一個糜蛋白酶單位；能抑制一個胰蛋白酶或糜蛋白酶單位的活力稱為一個抑制劑活力單位(U)。例如，活性>9000BAEE單位/mg，即在適宜的條件下，每毫克的本產(chǎn)品至少可以抑制能水解9mmol BAEE的胰蛋白酶量。
