產(chǎn)品簡介：
- 活死細菌染色試劑盒（LIVE/DEAD Bacterial Viability and Counting Kit, for flow cytometry）可以通過流式細胞儀有效的區(qū)分活、死細菌并實現(xiàn)定量檢測；而且對各類細菌的混合 物也可以實現(xiàn)定量分析檢測。該試劑盒采用兩種核酸染料來進行細菌活力測定：綠色熒光染料meilungreen（自主研發(fā)，功能等同于SYTO 9）以及紅色熒光染料PI（碘化丙啶），并通過標準微球精準測量樣品體積。用適當比例的meilungreen與PI混合物染色時，細胞膜完好的細菌發(fā)出明亮的綠色熒光，而細胞膜受損的細菌則表現(xiàn)出綠色熒光明顯減弱，同時發(fā)出較強的紅色熒光。細胞類型和革蘭氏特征會影響死細菌產(chǎn)生紅色熒光的強度。meilungreen與PI染料在大部分流式細胞儀中都是由488nm激光器實現(xiàn)有效激發(fā)的，各自的核酸復合物熒光信號可分別在綠色通道和紅色通道中 檢測到，并且?guī)缀鯖]有背景熒光。
- 標準微球懸浮液作為樣品體積的參考標準，尺寸和熒光經(jīng)過仔細篩選，以確保微球在流式細胞檢測中熒光–側(cè)向散射圖中可以明顯的區(qū)別于被染色的細菌。用meilungreen和PI對細菌培養(yǎng)液進行簡單染色，在流式細胞儀上分析樣本前加入固定數(shù)量的微球�；罹退谰约拔⑶蛟跓晒�–側(cè)向散射圖中很容易區(qū)分，然后通過細胞圖中細菌事件數(shù)與微球事件數(shù)的比值來計算死菌和活菌的濃 度（下圖1）。
- 實驗數(shù)據(jù)展示
- 1. 革蘭氏陰性菌（大腸桿菌為例）活死細菌染色流式檢測結(jié)果對比
圖1：大腸桿菌活死細菌染色流式檢測結(jié)果。大腸桿菌的活菌（未處理）、死菌（70%乙醇處理）懸液按一定比例混合，分別采用本試劑盒和進口品牌試劑盒進行流式檢測。通過綠色熒光或者紅色熒光對側(cè)向散射結(jié)果圖，分別圈出細菌群與標準微球群，然后通過綠色熒光對紅色熒光流式結(jié)果圖展示細菌群的分布�；�、死菌的濃度計算可以通過綠色或者紅色熒光對側(cè)向散射流式結(jié)果圖、或者綠色熒光對紅色熒光流式結(jié)果圖，根據(jù)實際情況選擇活死菌分群最明顯的結(jié)果圖來進行計算�；睢⑺谰旱姆植嘉恢脮蚣毦N類和參數(shù)設(shè)置而存在差別，一些點會分布于劃定區(qū)域以外，也應進行適當?shù)脑u估。結(jié)果顯示活死細菌染色試劑盒檢測效果媲美進口品牌。 - 2. 革蘭氏陽性菌（乳酸桿菌為例）活死細菌染色流式檢測結(jié)果對比
圖2：乳酸桿菌活死細菌染色流式檢測結(jié)果。乳酸桿菌的活菌（未處理）、死菌（電穿孔處理）懸液按一定比例混合，分別采用本試劑盒和進口品牌試劑盒進行流式檢測。通過綠色熒光或者紅色熒光對側(cè)向散射結(jié)果圖，分別圈出細菌群與標準微球群，然后通過綠色熒光對紅色熒光流式結(jié)果圖展示細菌群的分布�；�、死菌的濃度計算可以通過綠色或者紅色熒光對側(cè)向散射流式結(jié)果圖、或者綠色熒光對紅色熒光流式結(jié)果圖，根據(jù)實際情況選擇活死菌分群最明顯的結(jié)果圖來進行計算�；�、死菌群的分布位置會因細菌種類和參數(shù)設(shè)置而存在差別，一些點會分布于劃定區(qū)域以外，也應進行適當?shù)脑u估。結(jié)果顯示活死細菌染色試劑盒檢測效果媲美進口品牌。
| 產(chǎn)品組成 | 100T |
|---|---|
| meilungreen核酸染料（3.34mM） | 200ul |
| PI(碘化丙啶)（20mM） | 200ul |
| 標準微球 | 2ml |
| 說明書 | 1份 |
- 操作簡易流程：
- 1. 準備菌懸液
2. 細菌染色
3. 制備單染管進行設(shè)備調(diào)節(jié)
4. 流式細胞儀檢測染色后的細菌
5. 計算：菌濃度=(菌群分布區(qū)事件數(shù)×稀釋倍數(shù))/(微球分布區(qū)事件數(shù)×5×106)/ mL - 適用菌種范圍：
- 本試劑盒適用菌種廣泛，主要包括：蠟樣芽胞桿菌、枯草桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、大腸桿菌、肺炎克雷伯菌、黃體微球菌、草分枝桿菌、銅綠假單胞菌、沙門氏菌、沙雷菌、宋內(nèi)志賀菌、金黃色葡萄球菌和釀膿鏈球菌等。以上菌種通過該試劑盒檢測的計數(shù)結(jié)果均能夠與標準平板計數(shù)結(jié)果表現(xiàn)出良好的相關(guān)性。
保存條件：
染料和標準微球懸液都需4℃避光保存。
- 注意事項：
- 1、核酸染料管，使用前需恢復至室溫，并經(jīng)過短暫離心后再開啟。
2、不可冷凍標準微球。
3、核酸染料有毒，須戴手套操作，做好安全防護。
我司所售出產(chǎn)品僅供于科研研究用途（非臨床科研研究）
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