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彩虹預(yù)染蛋白Marker III(1.5-45 kD)

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 彩虹預(yù)染超低分子量蛋白質(zhì)Marker III(1.5-45 kD)


Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight Protein Marker III(1.5-45 kD)

● 儲(chǔ)存、運(yùn)輸及效期:

  -20℃保存,濕冰運(yùn)輸,有效期1年。

● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介

    彩虹預(yù)染超低分子量蛋白質(zhì)Marker III可以直接觀察蛋白電泳及清晰判斷Western Blotting的轉(zhuǎn)膜效果。本產(chǎn)品由7種多肽和蛋白質(zhì)組成,分子量大小為 1.5 kD,4 kD(紅色),8 kD, 15 kD(綠色),20 kD, 30 kD,45 kD (注:蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非預(yù)染蛋白Marker標(biāo)定過。)
● 使用說(shuō)明:

第一次收到該產(chǎn)品,常溫融化后,徹底混勻,離心快甩將溶液完全收集到管底。

一. 制膠:

說(shuō)明:可以根據(jù)以下步驟自己制備凝膠。也可以選擇購(gòu)買我司Tris-Tricine-PAGE凝膠制備及電泳試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.1 配制分離膠

1.1.1 按照表1將組份加入到小燒杯中混合。

1.1.2加入10%APS和TEMED,立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

1.1.3 在玻璃板中迅速灌入適量分離膠溶液,使液面和短玻璃板上沿之間的距離比梳齒長(zhǎng)0.5 cm即可(注:此溶液為過量,請(qǐng)勿全部注入)。然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-2 cm的無(wú)水乙醇,使凝膠表面保持平整。

1.1.4 靜置15-30分鐘,待分離膠和乙醇層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。

注:凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí),聚合較快;冬天氣溫低時(shí),聚合時(shí)間會(huì)延長(zhǎng)?梢愿鶕(jù)表1的標(biāo)準(zhǔn)條件調(diào)節(jié)促凝劑的加入量。分離膠25℃條件下,約20分鐘可以聚合。

表1  (一塊1 mm mini膠用量)

 

分離膠

濃縮膠

 

18T, 5%C /5 ml

5T, 3.3%C/2 ml

40% PAA19:1

2.25 ml

/

40% PAA (29:1)

/

0.25 ml

凝膠緩沖液

1.25 ml

0.5 ml

乙二醇(電泳級(jí))

1.5 ml

/

ddH2O

/

1.25ml

10APS

50 μl

20 μl

TEMED

5 μl

2 μl

1.2 配制濃縮膠

1.2.1 去除覆蓋在分離膠上的乙醇層,用濾紙將殘留乙醇吸去。

1.2.2 按照表1將各組份加入到小燒杯中混合。

1.2.3 加入10%過硫酸銨和TEMED,立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

1.2.4 將梳子插入凝膠內(nèi),避免產(chǎn)生氣泡。

1.2.5 靜置30-60分鐘裝待凝膠聚合

注:凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí),聚合較快;冬天氣溫低時(shí),聚合時(shí)間會(huì)延長(zhǎng)?梢愿鶕(jù)表1的標(biāo)準(zhǔn)條件調(diào)節(jié)促凝劑的加入量。濃縮膠25℃條件下,約40分鐘可以聚合。

二. 電泳:

2.1 取Marker樣品,充分混勻后備用。不要加熱處理。

2.2 電泳前,將10×陽(yáng)極緩沖液和10×陰極緩沖液用蒸餾水稀釋成1×緩沖液備用。將電泳槽的外槽加入1×陽(yáng)極緩沖液,內(nèi)槽加入1×陰極緩沖液,輕柔拔出梳子,將Marker或蛋白樣品(已經(jīng)過2×Tricine上樣緩沖液[Cat No:TP050]處理)加入點(diǎn)樣孔,參考下表進(jìn)行電泳,至每條帶都清晰可見時(shí)停止電泳。整個(gè)電泳過程大約需要2-3個(gè)小時(shí)。

表2 多肽電泳條件

恒電壓

150V

起始電流

60-75mA/板膠

結(jié)束電流

15-25mA/板膠

電泳時(shí)間

2-3小時(shí)

三. 染色

根據(jù)常規(guī)實(shí)驗(yàn)步驟,用配方6和7(表3:參考隨貨說(shuō)明書)進(jìn)行染色和觀察。如果使用配方6進(jìn)行染色時(shí)效果不好或考慮其毒性,請(qǐng)選擇本公司的FastBlue蛋白染色液,該產(chǎn)品除具有染色快,無(wú)毒,靈敏性高等特點(diǎn)外,還能對(duì)小肽在染色中起到固定作用,不至于小肽在染色和脫色中從凝膠中脫離,是常規(guī)染色液的理想替代品。
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