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Ar.1193 Electroporation-Competent Cell

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 Ar.1193 Electroporation-Competent Cell是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌,它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個(gè)別裸子植物。Ar.1193發(fā)根農(nóng)桿菌含有pRi1193農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒,特別適合豆科,茄科植物毛狀根的誘導(dǎo),同時(shí)具有羧芐青霉素,鏈霉

基因型

Agrobacterium rhizogenes (carb R,strR,lifR ) pRi1193 (agropine type)

Ar.1193 Electroporation-Competent Cell產(chǎn)品說明

發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌,它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個(gè)別裸子植物。Ar.1193發(fā)根農(nóng)桿菌含有pRi1193農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒,特別適合豆科,茄科植物毛狀根的誘導(dǎo),同時(shí)具有羧芐青霉素,鏈霉素,利福平抗性。開發(fā)的Ar.1193電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化,感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pCAMBIA2301質(zhì)粒(卡那霉素抗性)檢測(cè),轉(zhuǎn)化效率>10cfu/μg DNA;經(jīng)pCAMBIA2301-ZH質(zhì)粒(size:40 kd)檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×10cfu/μg DNA。

常規(guī)操作方法

1. 0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲(chǔ)存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,使乙醇充分揮發(fā),待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中,壓實(shí)冰面,電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。

2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘,待其融化,加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA(體積不大于6ul,用試劑盒抽提,雙蒸水溶解;轉(zhuǎn)化效率較高,次使用前做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量),用手管底混勻,立即插入冰中,用200 μl槍頭將感受態(tài)-質(zhì)粒混合物快速移到電擊杯中,蓋上杯蓋,空管保留待用。

3. 啟動(dòng)電轉(zhuǎn)儀,設(shè)置參數(shù):C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此參數(shù)為Biorad 推薦,使用者也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的protocol操作),將電擊杯從冰中拿出,吸水紙吸干外表面水份,快速放入電轉(zhuǎn)槽中,啟動(dòng)電擊,電擊完成快速插入冰中,加入1 ml無抗生素的TY,并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中,28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時(shí)。

4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的TY平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天

 

● 農(nóng)桿菌相關(guān)抗生素配方:

常用農(nóng)桿菌抗性: (R:抗;S:敏感。)

農(nóng)桿菌菌株

羧芐青霉素(carb)

鏈霉素(strep)

利福平(rif)

氯霉素(cam)

硫酸卡那霉素(kan)

Ar.A4

 S

 S

 S

 S

 R

MSU440

 S

 R

 S

 S

 S

Ar.Qual

 S

 R

 S

 R

 S

C58C1

 S

 R

 R

 S

 S

ATCC15834

 S

 S

 S

 S

 S

K599

 S

 R

 S

 S

 S

Ar.1193

 R 

 R

 R

 S

 S

 

● TY配方(1L):

   Tryptone                5g

   Yeast extract          3g

   補(bǔ)水到1L體積,*溶解后,121度、20分鐘高溫滅菌

   配制1M的氯化鈣水溶液,121度、20分鐘高溫滅菌

   每1L 滅菌的TY液體營(yíng)養(yǎng)液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可。

   若配制TY固體培養(yǎng)基,則加入15g 瓊脂粉。

 

注意事項(xiàng)

1. 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10;質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染,轉(zhuǎn)化效率急劇下降;質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。

2. 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞中不可混入氣泡,轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?上鄳(yīng)減少終用于涂板的菌量。

3. 平板上陽(yáng)性克隆密度過大時(shí),由于營(yíng)養(yǎng)不足,陽(yáng)性克隆生長(zhǎng)變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應(yīng)減少質(zhì)粒用量或終用于涂板的菌量。

 

4.  Ar.1193具有羧芐青霉素,鏈霉素,利福平抗性,不可用于具有羧芐青霉素,鏈霉素,利福平抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。

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