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Ar.1193 Chemically Competent Cell是根瘤菌科（Rhizobiaceae）農(nóng)桿菌屬（agrobacterium）的一種革蘭氏陰性土壤細菌，它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物。Ar.1193發(fā)根農(nóng)桿菌含有pRi1193農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒，特別適合豆科，茄科植物毛狀根的誘導(dǎo)，同時具有羧芐青霉素，鏈霉素，利福平抗性。

基因型

Agrobacterium rhizogenes (carb^R,str^R,rif^R ) pRi1193 (agropine type)

Ar.1193 Chemically Competent Cell產(chǎn)品說明

發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌，它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物。Ar.1193發(fā)根農(nóng)桿菌含有pRi1193農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒，特別適合豆科，茄科植物毛狀根的誘導(dǎo)，同時具有羧芐青霉素，鏈霉素，利福平抗性。本公司生產(chǎn)的Ar.1193化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pCAMBIA2301質(zhì)粒（卡那霉素抗性）檢測，轉(zhuǎn)化效率>10⁴ cfu/μg DNA。

常規(guī)操作方法

1.取-80℃保存的Ar.1193發(fā)根農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。

2. 每100μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA（轉(zhuǎn)化效率較高，一次使用前做預(yù)實驗確定所加質(zhì)粒的量），用手快速、劇烈打管底混勻或用槍吹吸混勻，依次放于冰中靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。

3. 冰浴中拿出放室溫，加入700μl 無抗生素的TY液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2小時。

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的 TY平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3 天

● 農(nóng)桿菌相關(guān)抗生素配方：

抗生素	配方	原液	工作液
羧芐青霉素 (carb)	雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌	50 mg/ml	50 μg/ml
硫酸卡那霉素 (kan)	雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌	50 mg/ml	50 μg/ml
鏈霉素 (strep)	雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌	10 mg/ml	50 μg/ml
利福平 (rif)	DMSO溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌	10 mg/ml	20 μg/ml
慶大霉素 (gent)	雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌	20 mg/ml	40 μg/ml
氯霉素（cam）	無水乙醇溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌	34 mg/ml	34 ug/ml

常用農(nóng)桿菌抗性： (R：抗；S：敏感。)

農(nóng)桿菌菌株	羧芐青霉素(carb)	鏈霉素(strep)	利福平(rif)	氯霉素(cam)	硫酸卡那霉素(kan)
Ar.A4	S	S	S	S	R
MSU440	S	R	S	S	S
Ar.Qual	S	R	S	R	S
C58C1	S	R	R	S	S
ATCC15834	S	S	S	S	S
K599	S	R	S	S	S
Ar.1193	R	R	R	S	S

● TY配方（1L）：

Tryptone 5g

Yeast extract 3g

補水到1L體積，*溶解后，121度、20分鐘高溫滅菌

配制1M的氯化鈣水溶液，121度、20分鐘高溫滅菌

每1L 滅菌的TY液體營養(yǎng)液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可。

若配制TY固體培養(yǎng)基，則加入15g 瓊脂粉。

注意事項

1. 加入質(zhì)粒時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉(zhuǎn)化效率急劇下降；質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。

2. 混勻質(zhì)粒時應(yīng)用手指快速打管底或用槍吹吸混勻，務(wù)必使質(zhì)�？焖�、均勻分散開，與感受態(tài)細胞充分接觸。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)�？上鄳�(yīng)減少終用于涂板的菌量。

3. 平板上陽性克隆密度過大時，由于營養(yǎng)不足，陽性克隆生長變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量或降低涂板的菌量。

4. Ar.1193具有羧芐青霉素、鏈霉素、利福平抗性，不可用于具有羧芐、鏈霉素或利福平抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。

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