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AGL1 Chemically Competent Cell100μl/支¥ 1200100 個
AGL1 Chemically Competent Cell為C58, RecA型背景,核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因rif和羧芐青霉素抗性基因carb,為了便于轉(zhuǎn)化操作,此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒 pTiBo542DT-DNA,此質(zhì)粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件, pTiBo542DT-DNA質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功
基因型
C58 RecA (rifR/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine
AGL1 Chemically Competent Cell產(chǎn)品說明
AGL1菌株為C58, RecA型背景,核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因rif和羧芐青霉素抗性基因carb,為了便于轉(zhuǎn)化操作,此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒 pTiBo542DT-DNA,此質(zhì)粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件, pTiBo542DT-DNA質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。AGL1菌株適用于水稻、擬南芥、楊樹等植物的轉(zhuǎn)基因操作。本公司生產(chǎn)的AGL1化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pCAMBIA2301質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。
2.每100 μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA(轉(zhuǎn)化效率較高,次使用前做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量),用手打管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
3. 加入700 μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基,于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天
(當(dāng)平板只含有50 μg/ml kan 時,28℃培養(yǎng)48 h即可;平板中同時加入50 μg/ml kan,20 μg/ml rif 時,需28℃培養(yǎng)60 h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90 h)。
注意事項(xiàng)
1. 加入質(zhì)粒時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10 ;質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染,轉(zhuǎn)化效率急劇下降;質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。
2. 混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。
3. 平板上陽性克隆密度過大時,由于營養(yǎng)不足,陽性克隆生長變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應(yīng)減少質(zhì)粒用量。
4. 利福平濃度不應(yīng)高于25 μg/ml,過高的利福平濃度不利于農(nóng)桿菌生長,會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率。本公司感受態(tài)計(jì)算轉(zhuǎn)化效率時所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板含有20 μg/ml rif則轉(zhuǎn)化效率降低到1/2。
5. 培養(yǎng)基中加入利福平的目的是防止雜菌生長、篩選農(nóng)桿菌;根據(jù)所用菌株抗性加入Ti質(zhì)粒篩選抗生素可防止Ti質(zhì)粒丟失,但Ti質(zhì)粒篩選抗生素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作,所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時不考慮這些抗生素,Ti質(zhì)粒丟失的概率極低 (可以忽略)。
試驗(yàn)前請仔細(xì)閱讀說明書,本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)使用。
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2、由于客戶自身操作原因?qū)е聦?shí)驗(yàn)失敗。
3、由于客戶沒有仔細(xì)確認(rèn)要訂購的指標(biāo),導(dǎo)致自己的指標(biāo)定錯。
4、產(chǎn)品已使用(質(zhì)量問題除外)。
文獻(xiàn)名稱