GV3101(pSoup-P19) Elec: 50μl/支
pGs2(control vector,10ng/μl ) 10μl
我要詢價
*聯(lián)系方式:
(可以是QQ、MSN、電子郵箱、電話等,您的聯(lián)系方式不會被公開)
*內(nèi)容:
當前位置:首頁 > PCR試劑盒 > 質(zhì)粒菌種感受態(tài)> GV3101(pSoup-P19) Electroporation-Competent Cell
GV3101(pSoup-P19) Elec: 50μl/支
pGs2(control vector,10ng/μl ) 10μl
基因型
C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline(pSoup-p19-tetR)
GV3101(pSoup-P19) Electroporation-Competent Cell產(chǎn)品說明
P19蛋白來源于番茄叢矮病毒,可抑制宿主對外源基因的RNA沉默效應(yīng),提高異源基因轉(zhuǎn)錄本的穩(wěn)定性,進而促進異源蛋白的表達,廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因植物及煙草葉片,擬南芥葉片,番茄葉片或原生質(zhì)體的瞬時表達系統(tǒng)中。GV3101菌株為C58型背景,核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif,為了便于轉(zhuǎn)化操作,此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pMP90 (pTiC58DT-DNA),此質(zhì)粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pMP90 (pTiC58DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 質(zhì)粒含有篩選標簽:gent,賦予GV3101菌株慶大霉素抗性;在GV3101菌株中轉(zhuǎn)入help質(zhì)粒:pSoup-p19即為GV3101(pSoup-p19)菌株,可幫助pGreen,62SK,pGs2等質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制,同時賦予該菌株四環(huán)素(tet)抗性。適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉(zhuǎn)基因操作。開發(fā)的GV3101 (pSoup-p19)電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化:經(jīng)pGs2(卡那霉素抗性)質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>105 cfu/ μg DNA;經(jīng)pGs2-ZH(卡那霉素抗性)質(zhì)粒(size:40 kd)檢測轉(zhuǎn)化效率可達5×103 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,使乙醇充分揮發(fā),待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中,壓實冰面,電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。
2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘,待其融化,加入1-5 μg質(zhì)粒DNA(質(zhì)粒體積不大于6ul,用試劑盒抽提,雙蒸水溶解),用手打管底混勻,立即插入冰中,用200 μl槍頭將感受態(tài)-質(zhì);旌衔锟焖僖频诫姄舯,蓋上杯蓋,空管保留待用。
3. 啟動電轉(zhuǎn)儀,設(shè)置參數(shù):C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此參數(shù)為Biorad 推薦,使用者也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的protocol操作),將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中,電擊完成快速插入冰中,加入700 μl無抗生素的LB并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中,28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天
(當平板只含有50 μg/ml kan 時,28℃培養(yǎng)48 h即可;平板中同時加入50 μg/ml kan,20 μg/ml rif 時,需28℃培養(yǎng)60 h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90 h)。
備注
1、農(nóng)桿菌相關(guān)抗生素配方:
抗生素 | 配方 | 原液 | 工作液 |
羧芐青霉素(carb) | 雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
硫酸卡那霉素(kan) | 雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
鏈霉素(strep) | 雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌 | 10 mg/ml | 50 μg/ml |
利福平(rif) | DMSO溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌 | 10 mg/ml | 20 μg/ml |
慶大霉素(gent) | 雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌 | 20 mg/ml | 40 μg/ml |
2、常用農(nóng)桿菌抗性:(R:抗;S:敏感。)
農(nóng)桿菌菌株 | 羧芐青霉素(carb) | 鏈霉素(strep) | 利福平(rif) | 慶大霉素(gent) | 硫酸卡那霉素(kan) |
AGL-1 | R | S | R | S | S |
EHA101 | S | S | R | S | R |
EHA105 | S | S | R | S | S |
LBA4404 | S | R | R | S | S |
GV3101 | S | S | R | R | S
|
3、LB及YEB配方:
component | LB(液體)/L | LB(固體)/L | component | YEB(液體)/L | YEB(固體)/L |
Tryptone | 10 g | 10 g | Tryptone | 5 g | 5 g |
Yeast extract | 5 g | 5 g | Yeast extract | 1 g | 1 g |
NaCl | 10 g | 10 g | 牛肉浸膏 | 5 g | 5 g |
NaOH | 調(diào)PH到7.0 | 調(diào)PH到7.0 | 蔗糖 | 5 g | 5 g |
Agar | - | 15 g | MgSO4*7H2O | 0.49 g | 0.49 g |
|
|
| NaOH | 調(diào)PH到7.0 | 調(diào)PH到7.0 |
|
|
| Agar | - | 15 g |
注意事項
1. 加入質(zhì)粒時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10;質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染,轉(zhuǎn)化效率急劇下降;質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。
2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?上鄳(yīng)減少終用于涂板的菌量。
3. 平板上陽性克隆密度過大時,由于營養(yǎng)不足,陽性克隆生長變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應(yīng)減少質(zhì)粒用量。
4. 利福平濃度不應(yīng)高于25 μg/ml,過高的利福平濃度不利于農(nóng)桿菌生長,會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率。本公司感受態(tài)計算轉(zhuǎn)化效率時所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板含有20 μg/ml rif則轉(zhuǎn)化效率降低到1/2。
5. 培養(yǎng)基中加入利福平的目的是防止雜菌生長、篩選農(nóng)桿菌;根據(jù)所用菌株抗性加入鏈霉素或慶大霉素可防止Ti質(zhì)粒丟失,但鏈霉素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作,所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時不考慮鏈霉素或慶大霉素,Ti質(zhì)粒丟失的概率極低 (可以忽略)。
試驗前請仔細閱讀說明書,本產(chǎn)品僅供科研實驗使用。
1. 所購產(chǎn)品均質(zhì)量保證!
2. 試劑盒方面提供技術(shù)指導(dǎo),Elisa試劑盒還可以提供代檢測服務(wù)。
3.本公司出售的任何產(chǎn)品均保質(zhì)保量,除以下情況,客戶可聯(lián)系我公司申請退換貨售后服務(wù)
以下情況不予辦理退換貨:
1、已超過受理期限的產(chǎn)品,如過保質(zhì)期。
2、由于客戶自身操作原因?qū)е聦嶒炇 ?br>
3、由于客戶沒有仔細確認要訂購的指標,導(dǎo)致自己的指標定錯。
4、產(chǎn)品已使用(質(zhì)量問題除外)。
文獻名稱
掃碼咨詢微信客服
掃碼咨詢微信客服
©Copyright 上海雅吉生物科技有限公司 All Rights Reserved. ICP備案號:滬ICP備18032507號-1 技術(shù)支持:阿儀網(wǎng)